pdecgf特异性rna抑制片段诱导裸鼠膀胱癌细胞凋亡的研究

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1、PDECGF特异性RNA抑制片段诱导裸鼠膀胱癌细胞凋亡的研究作者：金宁张灵肖博晗常喜华【摘要】目的利用RNA干扰技术在裸鼠膀胱癌动物模型中通过抑制靶向沉默血小板源性内皮生长因子基因（PDECGF）的表达，探讨其在活体动物肿瘤组织中的作用。方法将psiPDECGF1及2稳定转染的阳性T24细胞株及其他对照组直接接种于裸鼠皮下，观察肿瘤细胞生长及成瘤情况、测定肿瘤体积的变化；免疫组化检查PDECGF蛋白表达；TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果裸鼠体内成瘤实验发现siRNA2组第21天时成瘤率只有50%，

2、而其他各组成瘤率为100%。siRNA2组生长速度明显慢于其他3组，siRNA2组不仅成瘤延迟，且生长速度明显慢于其他3组(P＜0.01)。免疫组化证实siRNA2组肿瘤组织PDECGF蛋白表达最低;TUNEL检测siRNA2组细胞凋亡数明显多于其他3组(P＜0.05)。结论PDECGFsiRNA载体稳定转染细胞株体内实验可见膀胱癌细胞成瘤率降低，成瘤延迟及肿瘤生长速度减慢，癌细胞凋亡增多。PDECGFsiRNA在裸鼠体内依然对膀胱癌细胞有明显抑制作用。【关键词】膀胱癌；PDECGF；RNA干扰；凋亡【

3、Abstract】ObjectiveToresearchthePDECGFgene′sfunctionontheanimaltumorbyinhibitingtheexpressionofthePDECGFinthenudemicebladdercarcinomaanimalmodelviasiRNAsystem.MethodsThebladdercarcinomanudemicemodelacellstoobservetumor'sgroorcellsapoptosisbyTUNELkitorcell

4、s.ResultsTheformrateoftumororexperimentinvivo.Therateofformtumorostthanthatofothergroupssignificantly(P＜0.05).ConclusionsPDECGFsiRNAcanstilldepressthebladdertumorinnudemiceorformingrateandprolongedtumorformingtimeandthereducedtumorgroa;PDECGF；RNAinterfer

5、ence;Apoptosis血管内皮生长因子（VEGF）与血管形成密切相关，是最重要的一种血管生长因子。肿瘤组织VEGF表达直接影响着肿瘤血管的生长和原发瘤的生长与浸润〔1〕。血小板源性内皮生长因子基因（PDECGF）作为VEGF超家族中的一分子在肿瘤的发病过程中具有重要作用。肿瘤生长具有血管依赖性，恶性肿瘤的侵袭性生长、转移及其预后依赖于血管生成，没有血管网络的滋养和带走新陈代谢废物肿瘤细胞就无法生存〔2〕。抑制血管生成能有效抑制肿瘤生长，因此抑制血管生成技术或药物可用于治疗肿瘤。封闭PDECGF基因

6、是治疗实体肿瘤的新思路。通过抑制或阻断VEGF在肿瘤组织表达，切断PDECGF对血管内皮细胞的作用，抑制肿瘤的血管生成，对抑制肿瘤的生长和转移有重要意义。前期研究己经在体外实验中得到较为肯定的PDECGFRNAi抑制膀胱癌细胞的效果〔3〕。为了进一步研究RNAi的体内抑瘤情况，通过裸鼠皮下成瘤实验检测生物体内psiPDECGF2对T24细胞致瘤能力的影响，为证实临床基因治疗膀胱肿瘤可行性打下初步的实验基础，以为临床治疗膀胱癌提供新的切入点。1材料与方法1.1psiPDECGF稳定转染细胞系的构建按分子

7、克隆技术将psiPDECGF1及2等质粒〔3〕转染入T24细胞，经G418筛选，用未转染的T24细胞做对照。对照细胞完全死亡后，再次用G418筛选。分为对照组、空载体组、siRNA1对照组以及siRNA2组。1.2裸鼠膀胱癌模型的建立裸鼠共24只，随机分为4组，每组各6只。100ml培养瓶培养各组稳定转染的细胞直至对数生长期，0.25%胰酶消化并计数，离心后取200μ1(1×105个细胞/μl)悬浮细胞，加入不含血清的DMEM制成细胞悬液，选择裸鼠右侧臀部外侧，消毒后进行皮下注射；每日观察成瘤情况，

8、成瘤后每3d称量裸鼠体重及测量肿瘤大小，记录肿瘤潜伏期及绘制肿瘤生长曲线，计算成瘤率、肿瘤抑制率和肿瘤生长指数。第30日脱颈法处死裸鼠，解剖取肿瘤组织，称重，做病理切片检查。用公式分别计算肿瘤体积、肿瘤抑制率和肿瘤生长指数。计算公式如下：肿瘤体积=肿瘤长径×肿瘤短径2×0.5。肿瘤抑制率(%)=(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%。1.3裸鼠肿瘤组织切片HE染色瘤体常规福尔马林固定，制作石蜡切片；脱蜡后，苏木精染色1