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《smac基因促丝裂霉素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、Smac基因促丝裂霉素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究?186?中华实验外科杂志2005年2月第22卷第2期ChinJEx口su理.February2005.Vol22.NoSmac基因促丝裂霉素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究汪良曾甫清郑丽端陈方敏刘迎【摘要】目的探讨SmaC基因的表达对于丝裂霉素(MMC)诱导膀胱癌细胞凋亡的影响.方法脂质体介导Smac基因转染膀胱癌T24细胞3d后,用低剂量丝裂霉素诱导凋亡启动,噻唑蓝(M1vr)比色分析检测癌细胞生长活性,吖啶橙一溴化乙锭荧光染色法及流式细胞术法检测细胞凋亡;免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应检测Smac基因
2、的表达.结果T24细胞在低剂量丝裂霉素的诱导下发生凋亡,两种方法检测细胞凋亡率,用0.05g/L丝裂霉素处理的T24细胞凋亡率分别为20,50%和18.84%,而经过转染SmaC后用0,05g/L丝裂霉素处理的T24细胞凋亡率分别为36,40%和33.52%,差异有统计学意义(P<0.05).结论促凋亡基因Smac在膀胱癌细胞中的活化表达可以明显增强细胞在刺激信号下的凋亡.【关键词】Smac基因;膀胱癌;丝裂霉素;脱噬作用Experimental~tudyonsmacgeneenhancingtheinductionofmitomycinCo
3、nbladderC~tllCeFapoptosisw『GLiang,ZENGFu—qing,ZHE『GLf—duan,eta1.DepartmentofUrology,UnionHospital,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430022,China【Abstract】0bjectiveToexploretheeffectofSmacgeneontheapoptosisinducedbymitomycinConthebladdercancerce
4、ll1ine"1"24.MethodsTheSmacgenewastransfectedintobladdercancercel11ineT24undertheinductionof1ipusome.TheintrinsicSmac1eve1wasdetectedbyimmunohistochemistryandRT.PCR.TheinvitrocellulargrowthactivitieswereassayedbyMTTcolorimetry.ApoptosisWasas—sayedbyflowcytometryandacridineorang
5、e—ethidiumbromidefluorescentstainingmethods.ResultsTheapoptosisrateof1_24cellsinducedbymitomycinCWasenhancedbytransfectedSmacgeneastom—paredwithcontro1cells.TheapoptosisWasdetectedbytwoways,TheapoptosisratesofT24cellswere20,50%and18.84%by0.05LmitomycinC,and36.40%and33,52%by0.0
6、5LmitomycinCplustransfectedSmacgenerespectively.ThereWassignificant出fference(P<0.05).ConclusionSmaccouldenhanceapoptosisofT24bymitomycinC.【Keywords】Smacgene;Bladdercarcinoma;MitomycinC;Apoptosis膀胱移行细胞癌是泌尿系统常见的恶性疾病.细胞凋亡受阻在肿瘤的发生发展中发挥着重要的作用.线粒体促凋亡蛋白Smac,也称为DIABLO,是新近发现的一种由线粒体释
7、放的促凋亡蛋白,参与细胞凋亡的下游反应,促进凋亡的发生【1-3].为探讨Smac作为膀胱癌基因治疗新靶点的可能,我们将Smac转染膀胱癌T24细胞中,在化疗药物丝裂霉素(MMC)诱导下,观察Smac基因的表达对于MMC诱导膀胱癌细胞凋亡的影响.材料和方法1.细胞培养:T24细胞培养液为含10%胎牛血清的RPMI1640(美国Gbico公司),取对数生长期细胞进行实验.基金项目:国家自然科学基金资助项目(30271301)作者单位:430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科(汪良,曾甫清,陈方敏,刘迎),病理科(郑丽端)?实验研究?
8、2.实验分组及基因转染:含人类Smac全长基因的真核表达载体由美国王晓东博士惠赠.MMC购自日本协和药业公司.实验分为空白
