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1、超声细胞粉碎提取黄芪多糖论文.freelembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。黄芪多糖是黄芪的主要成分之一,其可显著提高机体的免疫力,增强人体细胞的生理代谢作用,能显著促进骨髓造血细胞DNA合成,加快有核细胞分裂过程,对体内血糖水平有双向调节作用。黄芪多糖在体外具有增强LAK细胞杀伤活性的作用,.freelembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao。JY
2、92-Ⅱ超声细胞粉碎仪(宁波新芝科器研究所),722型光栅分光光度计(山东高密彩虹分析仪器有限公司)。2方法与结果2.1黄芪样品的前处理称取黄芪样品置于圆底烧瓶中,加80%的乙醇回流提取3h后取出,烘干后备用。2.2超声细胞粉碎提取法精确称取经乙醇处理后的黄芪样品28.6g,放入三角瓶中,加入8倍量的蒸馏水,连接于超声细胞粉碎仪上,调整工作时间99s和间隔时间1s,工作次数36次。开始超声处理,并逐渐调节工作压力至最大。1h后取出,过滤,向滤渣中再加入6倍量的蒸馏水,调整工作时间99s,间隔时间1s,工作次数24次。超声处理,并逐渐调节工作电压至最大,4
3、0min后取出过滤,并合并2次滤液。将滤液按1∶1比例进行浓缩至28.6mL,再加入3倍量的95%乙醇进行沉淀,沉淀干燥后称量。2.3黄芪多糖的传统提取工艺2.3.1水煎法精确称取经乙醇处理过的黄芪样品28.6g置于烧杯中,首先加入8倍量的蒸馏水,煎煮1h后过滤,然后再向滤渣中加入6倍量的蒸馏水,煎煮40min后过滤。将2次滤液合并。抽滤除杂,将滤液取出,按1∶1浓缩至28.6mL,加3倍量的95%乙醇进行沉淀,待所得样品沉淀干燥后进行称量。2.3.2稀碱浸提法精确称取经乙醇处理过的黄芪样品28.6g置于烧杯中,加入8倍量的2%氢氧化钠,过夜12h。过滤
4、,取出上清,再向滤渣中加入6倍量的氢氧化钠,过夜12h。滤出上清,并将2次滤液合并,除杂后用稀盐酸调至中性,按1∶1浓缩至28.6mL,加入3倍量的95%乙醇进行沉淀,待所得样品沉淀干燥后进行称量。2.4黄芪多糖含量的测定采用苯酚硫酸法测定黄芪多糖的含量2。准确称取标准葡萄糖4mg溶于100mL容量瓶中,加水至刻度,分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8mL,各以蒸馏水补齐至2mL,再加入6%的苯酚1mL及5mL浓硫酸,静止10min,摇匀,室温放置20min以后于490nm测光密度值,以2mL水同样显色操作作为空白,以横
5、坐标为多糖含量、纵坐标为光密度值得标准曲线,根据曲线得回归方程。2.53种方法提取所得黄芪多糖总量及纯度的比较取等质量的样品分别用碱提法、水煎煮法、超声细胞破碎法获得的黄芪多糖的总量分别为1.204、1.011、0.639g。通过苯酚硫酸法测定黄芪多糖含量分别为4.70%、5.90%、7.60%。从结果中可以看出,碱提法虽然获得的多糖总量最多但含量最低；超声细胞粉碎法多糖含量最高、最纯。2.6精密度试验取1g/L的多糖溶液0.1mL,按苯酚硫酸法测定吸光值,连续获得5个数据,结果见表1。通过准确度的测定来检验仪器的重现性。通过实验获得数据,得相对标准偏差
6、为0.37%(小于1%),说明本实验仪器的重现性良好。2.7加样回收率试验取经乙醇处理后的黄芪样品3份分别放入三角瓶中,加入8倍量的蒸馏水,连接于超声细胞破碎仪上,调整工作时间99s和间隔时间1s,工作次数36次。开始超声处理,并逐渐调节工作压力至最大。按苯酚硫酸法测吸光度,结果见表1。通过加样回收率的测定检查分析过程中样品的损失情况,从而评估实验方法的可靠性。通过实验测定,平均加样回收率为98.834%,说明在分析过程中样品损失较少,实验方法较为可靠。表1样品的加样回收率测定结果（略）3讨论3.1用80%乙醇对黄芪样品进行前处理的目的3本实验目的是考察
7、黄芪多糖的提取工艺,而黄芪样品本身不仅含有多糖,而且含有酯类、小分子单糖和低聚糖,必须经过提纯方可使用。本实验用80%的乙醇对黄芪样品进行前处理,目的是除去黄芪中的小分子单糖、低聚糖和酯类,避免这些成分对多糖含量测定的影响。3.2超声波细胞粉碎仪工作原理超声波细胞粉碎仪工作原理基于超声波在液体中的空化作用,换能器将电能量通过变幅杆在工具头顶部液体中产生高强度剪切力,形成高频的交变水压强,使空腔膨胀、爆炸将细胞击碎。另一方面,由于超声波在液体中传播时产生剧烈地扰动作用,使颗粒产生很大的加速度,从而互相碰撞或与器壁互相碰撞而击碎。上述作用亦足以使两种(或两种
8、以上)不相溶液体混合均匀。由于该装置能达到一般的机械搅拌或捣碎所达不到的效果,故
