草珊瑚离体不定丛芽诱导因子筛选的研究论文

《草珊瑚离体不定丛芽诱导因子筛选的研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、草珊瑚离体不定丛芽诱导因子筛选的研究论文.freelg/L6BA+01mg/LIBA.freelb)Nakai，属金粟兰科Chloranthaceae草珊瑚属Sarcandra，又叫九节茶、肿节风、接骨木，为多年生草本或亚灌木。草珊瑚具消炎、清热、解毒和舒筋活血作用，临床用于治疗多种炎症。最新研究发现草珊瑚对肿瘤，尤其是急性白血病有一定治疗效果1。近年来草珊瑚已被开发成一系列药品和日用品，如草珊瑚口服液2、草珊瑚清口香3和草珊瑚注射液4等。随着开发利用的不断扩展，忽视了

2、对其资源的保护，致使野生资源遭受毁灭性的破坏，因此挽救草珊瑚种质资源的研究势在必行。目前对草珊瑚的研究主要集中在常规栽培、药材的组织鉴别以及化学成分组成的分析上，在离体快速繁殖方面的研究甚少。本文在建立草珊瑚离体快速繁殖培养体系研究的基础上，对草珊瑚的离体丛芽诱导培养进行了多方面考察，旨在为肿节风药材生产的源头——草珊瑚优质种苗(试管苗)繁育的规模化、产业化生产奠定基础。现报道如下。1材料与方法11药材试验药材采自广州帽峰山野生草珊瑚，经广州中医药大学药用植物学教研室潘超美教授鉴定，确认为金粟兰科植物

3、草珊瑚Sarcandraglabra(Thumb)Nakai。取其种子，经消毒后在无菌条件下诱导萌发，切取胚和下胚轴诱导获得无菌丛芽和再生植株，以无菌再生苗的茎段作为诱导不定芽的材料(图1)。12主要仪器与试剂6苄氨基嘌呤(6BA)由上海求精生化试剂仪器有限公司生产(批号：20060718);吲哚丁酸(IBA)由上海求精生化试剂仪器有限公司生产(批号：20070310);琼脂粉由湛江新台兴海洋生物制品有限公司生产(批号：2007818);其他试剂均为化学纯;DLCJ1F型单人双面超净工作台由

4、哈尔滨东联电子技术有限公司提供;YXQSGD型全自动高压灭菌锅由广东医疗器械厂提供;XS125A型电子分析天平由瑞士Sartorius公司提供。LRH300G型生物光照培养箱由广东医疗器械厂提供。表1丛芽诱导培养基的L16(45)正交试验设计13多种影响因子的筛选5采用MS培养基为基本培养基，培养基按照常规方法，根据表1正交试验设计的不同配方配制，添加30g/L的蔗糖、6g/L琼脂粉，pH58～60，121℃～124℃(11kg/cm2压力)灭菌15min。在无

5、菌条件下，将草珊瑚无菌再生苗切成1～15cm长带节茎段，接种于培养基中，每瓶3～4个。培养温度(25±2)℃，光照用日光灯1800～2200lx，每天连续光照8h。28d后统计不定芽诱导率及不定芽的增殖率。2结果与分析21不同激素配比对草珊瑚丛芽诱导的影响从表2结果可知，处理10和处理14均能获得较高的不定芽诱导率，即3mg/L6BA+01mg/LIBA和25mg/L6BA+01mg/LIBA的组合，在此激素组合水平下，草珊瑚不定芽生长迅速，较粗壮，说明草珊瑚

6、不定芽诱导阶段要求有较高的外源激素水平。但高含量的细胞分裂素(处理13~16)会在不定芽形成后，芽的基部膨大导致材料愈伤化。故不定芽诱导中以处理10组合较为合适。在两种激素的试验处理中，单独使用6BA的量达3mg/L(处理13)时，不定芽诱导率可提高到7368%，不定芽萌动时间提早，接种后15d左右就会看到茎节处长出不定丛芽，但芽体较纤弱。图2结果显示，虽然6BA、IBA和诱导率之间无明显线性关系，但在IBA浓度较低(IBA=0、01mg/L)时，随着6BA浓度的增加，诱导率基本呈现增加

7、的趋势，当6BA为25mg/L，IBA为01mg/L时诱导率最高，达到8298%。当IBA浓度大于01mg/L时，诱导率的变化波动较大。结合表2的直观分析表明，RA为0219、RB为0226，两种因子对丛芽诱导产生效应是IBA6BA，6BA是影响不定丛芽分化的主要因子。22光照时间和强度对草珊瑚丛芽诱导的影响将草珊瑚无菌再生苗茎段接种到试验处理10的培养基中，置于光照培养箱中，温度设定为25℃，考察不同光照时间和强度对草珊瑚丛芽诱导的影响，结果见图3、图4

8、。在光照强度约为1800～2000lx的直光培养中，光照8h的草珊瑚丛芽生长较快，植株生长迅速、叶片颜色深绿。但随着光照时间的增长，诱导率逐渐下降。此外，自然光照比放在培养箱中直光光照生长更迅速、丛芽诱导更好。而图4结果表明，光照强度对草珊瑚不定芽的生长有很大的影响，每增加2000lx，诱导率都降低10%以上，在强光照下，草珊瑚不定芽生长变缓慢，叶片边缘发黄、皱缩，几乎不萌发出新芽，这一现象与草