白僵菌高孢粉生产技术及在农林业生物防治上的应用

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1、白僵菌高孢粉生产技术及在农林业生物防治上的应用白僵菌高孢粉生产技术及在农林业生物防治上的应用1白僵菌高孢粉生产流程和技术要点　　土洋结合法生产工艺流程，主要包括以下技术环节。即原种筛选及固定、初级原种培养、中期菌液扩大、固体料扩大、高孢粉干燥、原粉提取、成品检验和包装。　　1.1原种筛选及固定人工选育或在林区选定被菌粉感染的僵虫或僵蛹，通过培养、分离和转种，即可得到高品质菌原种。　　1.2原种培养　　1.2.1营养料的配制取米粉35份、糖4份、琼脂4份、水适量（pH值自然），将米粉放入清水中煮沸，继之选用干净纱布过滤去剩余物残渣

2、，然后加入琼脂、糖，经过充分搅拌，等待琼脂溶化后再装入试管内，盖好试管塞；营养料灌入量以试管容积的1/5为宜，5～10支一捆放人高压灭菌锅中进行高温灭菌30min，并将其趁热摆成斜面，以便于后面的接种。　　1.2.2转种和培养严格要求在无菌条件下操作，于配制好的试管培养基中接入高品质菌原种，将其置于25℃温度下培养。经过1～2d后，菌丝即可基本布满料面；3～5d后开始形成孢子，此时可适当调高培养室温度，以加速其高品质菌原种孢子的形成，大约有6～8d的时间即可完成孢子发育。　　1.2.3质量检查高品质菌原种，其菌丝呈白色茸毛状，生

3、长丰满，菌苔光滑平坦，孢子形成快且孢子层厚实，轻轻碰敲试管壁可发现有很多孢子粉掉落或飞扬。　　1.3初级菌种培养营养料的配制与前期相同，将培养好的菌原种接入三角烧瓶中，放在摇床上震动，温度控制在25～28℃，培养48h。　　1.4中期菌液扩大　　1.4.1营养液的配制按照玉米面∶麦麸∶水=2∶3∶10的比例，放入铁制培养罐中搅拌均匀后煮熟、过滤，再将其装入60只铝制罐中（每只铝制罐10～12kg），采用高压灭菌30min后备用。　　1.4.2转种培养在确保无杂菌污染的条件下，将优质菌种接入已经准备好的营养液中，完成接种后将瓶子放

4、置于25～28℃条件下进行培养，环境温度不得超过32℃，否则易造成所接种的菌种死亡；培养48h待菌丝长满瓶壁，良好的菌液呈显酱红色、粘稠状，此时结束培养，将其移放到比较安全的地方待用。　　1.5固体转种生产　　1.5.1固体基料的配制按麸皮∶谷壳∶大米=4∶4∶2比例，拌匀后装入线制麻袋（每袋15～25kg为宜）扎紧袋口，加温加压灭菌（100℃、2～3h）。　　1.5.2转种生产将灭菌后的固体基料，放入已经过充分消毒的培养生产室内，待料温下降至到25～28℃之间，可在一般的自然环境中进行接种。接种量：菌种和固体基料的比例通常控制

5、在15∶100。接种时需要多人配合，1人操作倒出菌种，多人辅助进行手工拌料，菌种和固体基料经过充分手工拌匀后倒入木质或塑料盘中拌好、铺平，厚度要求控制在3～4cm之间。　　1.5.3白僵菌生长期间管理白僵菌生长期间，根据其不同的生长阶段，要合理控制好温度，这是大床发酵成败与否的关键，适时进行上下调盘，保证菌丝生长均衡匀称。　　1.5.3.1孢子产生期间其孢子产生前期最合适的温度是在24～26℃，在生长的第1阶段（即孢子萌芽前期），必须将环境温度控制在21～23℃范围内，因为此阶段不产生热量，所以室温约高于料温2～3℃，从而满足了

6、此期间对温度的要求。到了孢子萌芽阶段，特别是在转种24h之内，一定要严格控制料温，维持在25℃以下就能有效地阻止杂菌污染。　　1.5.3.2菌丝生长中期当孢子萌芽后，其芽管迅速增长而转入菌丝生长中期，若条件适宜接种48h菌丝快速生长，可以布满整个料盘，此时固体料开始凝结成块；由于菌丝生长产生较多热量，会导致料温快速上升，48h达30～35℃，达到最高峰值；以后稳定至72h左右，菌丝生长基本结束。料盘内外都呈现出一片白色菌丝层。此阶段应严格控制温度在33℃以下，一旦超过33℃虽然菌丝生长旺盛，但会导致菌丝死亡或固化，不产生孢子或孢

7、子量少。　　1.5.3.3孢子生长阶段菌丝生长发育结束（即接种72h）后，很快转入孢子生长阶段。孢子产生的最适温度为26℃左右，此阶段培养室温度应控制在26～28℃；因为此时料温已经恒定，约高于室温2～3℃，固体菌料会逐渐变干，通常在第7d即可出料。将固体菌料倒扣在铺有报纸的竹席上，放置于室温30～35℃的干燥通风房间内，至第10d孢子达到充分发育，固料呈现白色松散状态，即可进行下一步的干燥处理。　　1.6高孢粉干燥通常放在室内或大棚通风处阴干，或在室内低温干燥，时间约为7～10d。　　1.7原粉提取利用负压原理，将干燥好的混合

8、菌料进行一、二、三级提取，一级分离稻壳、麦麸，二级分离破碎稻壳、麦麸及其它细料，三级收集高孢粉（孢子含量1000亿个/g）　　1.8产品质量检查　　1.8.1直观检查用手指接触到高孢粉产品时有光滑感，白色略黄粉雾飞扬，粉雾越浓，说明孢子含量越高、质量越好。　　1