马尾松毛虫高毒力球孢白僵菌菌株的生物学特性.doc

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1、马尾松毛虫高毒力球孢白僵菌菌株的生物学特性　　　　【研究意义】马尾松毛虫是我国南方松树林中发生最严重的一种森林害虫，主要为害马尾松、湿地松、火炬松和黑松等松属植物，松树一旦受害，轻则松针枯黄卷曲，发生严重时形似火烧，松林大片枯死。球孢白僵菌是一种广谱性杀虫真菌，林间应用时对人畜无害，安全环保，也因其较强的杀虫活性被广泛应用于松毛虫等多种农林害虫的防治。不同球孢白僵菌菌株产孢量高低、孢子萌发快慢及多少等与其毒力存在密切的相关性。因此，研究，对应用球孢白僵菌防治马尾松毛虫具有重要意义。【前人研究进展】前人对不同球孢白僵菌菌株的生物学特性已有较多报道。邝灼彬等测试了6个温度对球孢

2、白僵菌菌株生长速率、产孢量及孢子萌发率的影响，结果表明，在17～2℃范围内，随着温度的升高，该菌株的菌落生长速率、产孢量、孢子萌发率均升高，2℃最有利于该菌株的生长、产孢及孢子萌发，在3℃下该菌株不能生长。熊琦等研究表明，分离自桃小食心虫幼虫上的球孢白僵菌菌株TST05在15～3℃范围内均能生长和产孢，在20～30℃范围内菌落直径和产孢量相对较高。不同的营养条件也会影响球孢白僵菌菌丝生长及产孢水平，适宜的营养能促进菌丝快速生长及产孢，增强杀虫活性。球孢白僵菌菌株Bb13生长的最佳碳源为葡萄糖，最佳氮源为蛋白胨；而球孢白僵菌HFW-05菌株生长的最佳碳源为蔗糖，最佳氮源为豆粕

3、粉。齐永霞等研究表明，球孢白僵菌Bb06菌株对单糖、双糖和多糖等多种碳营养及有机氮和无机氮等多种氮营养均能够利用，但利用程度存在一定差异。【本研究切入点】球孢白僵菌菌株的生长、产孢及孢子萌发与环境和营养条件有关，但不同菌株其生物学特性存在一定差异，因此很有必要对筛选到的马尾松毛虫高毒力球孢白僵菌菌株生物学特性进行研究。【拟解决的关键问题】以前期筛选到的马尾松毛虫高毒力球孢白僵菌菌株B-2、B-14和B-19为材料，研究不同温度、碳源和氮源条件对球孢白僵菌菌株生长速率、产孢量及孢子萌发率的影响，旨在优化球孢白僵菌的大规模工业化生产工艺，为利用球孢白僵菌防治马尾松毛虫提供理论依

4、据。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　马尾松毛虫高毒力球孢白僵菌菌株B-2、B-14和B-19由华中农业大学植物真菌病害实验室筛选获得。菌株寄主及地理来源信息详见表1。 　　1.试验方法 　　1..1不同温度对球孢白僵菌高毒力菌株生长、产孢及孢子萌发的影响在培养d且生长一致的菌落边缘打取直径mm的菌丝块接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，分别置于17、20、23、26、29和3℃的培养箱中培养，每处理重复3皿，光照条件设为1h光照/1h黑暗。采用十字交叉法测量菌落直径，每隔d测量一次，直到第10d，计算菌株生长速率。 　　打取直径mm的菌丝块接种于PDA培养基上，在不

5、同温度条件下培养10d的菌落中心打取一块直径mm的菌丝块，放入装有50mL无菌水的小烧杯中，用磁力搅拌器搅拌1min，使孢子充分分散，采用血球计数板计数并计算产孢量。 　　各菌株在PDA培养基上培养10d后，分别用无菌水收集孢子，制成孢子悬浮液，将孢子悬浮液滴在无菌载玻片上，放入铺有湿润滤纸的培养皿内，置于不同温度下培养，每处理重复3次。2h后镜检孢子萌发情况，统计孢子萌发数并计算孢子萌发率；每个重复至少镜检50个孢子。 　　1..不同碳源对球孢白僵菌高毒力菌株生长、产孢及孢子萌发的影响以查比克培養基为基础培养基，分别用等质量碳元素的麦芽糖、葡萄糖、可溶性淀粉代替蔗糖，接入

6、直径mm的菌丝块，2℃条件下培养，参照方法测量供试菌株的生长速率、产孢量和孢子萌发率。 　　1..不同氮源对球孢白僵菌高毒力菌株生长、产孢及孢子萌发的影响以查比克培养基为基础培养基，分别用等质量氮元素的蛋白胨、牛肉膏、酵母浸出液代替硝酸钾，接入直径mm的菌丝块，2℃条件下培养，参照方法测量供试菌株的生长速率、产孢量和孢子萌发率。 　　1.统计分析 　　采用DPS对试验数据进行方差分析，用LSD法比较各处理的差异显著性。 　　结果与分析 联盟　　2.1不同温度对球孢白僵菌菌株生长、产孢及孢子萌发的影响 　　3株供试球孢白僵菌菌株在6个温度梯度下均能生长、产孢及孢子萌发，但不同

7、温度或菌株间存在一定差异。在17～2℃下，供试菌株的生长速率、产孢量及孢子萌发率均随着温度的升高而升高；在2℃下各项生物学指标均达最高值；随着温度的继续升高，各项指标均有所下降。总体来说，26～2℃最适于球孢白僵菌的生长、产孢及孢子萌发，温度过高或过低均不利于球孢白僵菌的生长、产孢及孢子萌发。　在2℃下比较3株球孢白僵菌菌株的生长速率、产孢量及孢子萌发率，发现以B-2菌株的生长速率最高，为/d，显著高于其他2株菌株；B-14菌株的产孢量最高，为×104个/mL，显著高于B-2菌株，但与B-19菌株差异不显著；3株供