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1、球孢白僵菌营养需求及培养条件研究报告人：姚珺玥1.研究背景2.研究内容3.研究方法4.主要结果与结论5.讨论1.研究背景球孢白僵菌(Beauveriabassiana)(以下简称白僵菌)是一种常见的昆虫病原真菌,具有寄主范围广,致病力强,对人畜林木作物无毒害,不伤天敌,不污染环境等特点，长期以来被用做生物防治害虫的重要手段。到目前为止,已被开发的白僵菌制剂有粉剂、可湿性粉剂、颗粒剂、油剂、乳剂、胶囊剂等。白僵菌油剂由于具有粘着力强,渗透性好,能破坏虫体表面蜡质层和几丁质层,利于芽管侵入的特点,使得其成为白僵菌主要的研发剂型。2.研究内容选用经生物测定毒力强的分离自马尾
2、松毛虫的Bb13为菌株,从有关生物学研究着手,将菌株基础培养制备白僵菌孢子粉的营养需求及培养条件进行正交组合实验,通过分析比较所得孢子的含孢量和萌发率,旨在筛选出生产高质量白僵菌孢子粉的营养需求及培养条件,为提高白僵菌孢子粉质量和抗逆性做出研究。3.研究方法1.接种及培养2.含孢量测定3.萌发率测定3.1接种及培养将经活化的菌种接入种子培养基,在(25±1)℃的摇床上振荡(170r/min)培养4d。培养液均匀地涂抹于表面平铺有无菌玻璃纸的SDAY培养基上(40个皿),倾去产孢培养基表面多余的培养液,并将培养皿用保鲜膜密封。将接过种的培养皿置于(25±1)℃的无菌培养
3、箱中培养5d,待产孢培养基表面长满菌丝时揭去保鲜膜,再培养4~6d使菌丝大量产孢,然后人工收获培养基表面的孢子粉,在常温下通风处晾干后贮存于密封塑料袋中,并放于4℃的冰柜中保存。3.2含孢量测定含孢量测定:称取20g待测孢子粉于50ml0.5%Tween-80无菌溶液中,用高速分散器分散均匀,稀释，摇匀后立即用血球板计数测定孢子悬浮液的浓度,每种待测孢子粉的测定重复5次,计算孢子粉的平均含孢量。3.3萌发率测定将待测孢子粉用0.5%Tween-80无菌溶液配成浓度为107个孢子/ml的悬浮液,吸取1ml加入到盛有9ml萌发营养液(蛋白胨0.5%、蔗糖1%、另加0.5%
4、OP)的小三角瓶中,(25±1)℃振荡(120r/min)培养24h后,用血球计数器计数液样中发芽和未发芽的孢子数,重复取样测定3次,计算平均萌发率,即为孢子粉的活孢率。孢子萌芽的标准为可见芽管长度等于或者大于孢子直径。4.主要结果与结论4.1.1碳源因素对孢子质量指标的影响就含孢量而言,碳源以葡萄糖(A1)最好,添加葡萄糖的培养基所产孢子的含孢量达到3.23×1011/g,其次是蔗糖,以添加乳糖的效果最差,含孢量仅为1.87×1011/g;就萌发率而言,也是以添加葡萄糖效果最好,使得孢子萌发率达到88.41%,其次为乳糖,以添加蔗糖和淀粉的效果较差,萌发率仅分别为8
5、5.67%和85.68%。4.1.2氮源因素对孢子质量指标的影响就含孢量而言,由图3可知,各氮源因素的影响差异不是特别显著,其中,以添加蛋白胨(B4)对提高的含孢量效果最好,使含孢量达到2.99×1011/g,其次是硝酸钾,以添加尿素的效果最差,含孢量仅为2.04×1011/g;就萌发率而言,由图4可知,以添加甘氨酸和蛋白胨的效果为最好,分别使孢子萌发率达到88.48%和88.07%,以添加硝酸钾的效果最差,孢子萌发率仅为84.96%。4.1.3不同微量元素对孢子质量指标的影响由图5和6可知,微量元素对孢子含孢量和萌发率影响的趋势基本相同,都是以Zn(E3)的效果最好
6、,使得孢子的含孢量和萌发率分别达到2.91×1011/g和88.68%,其次是Cu,都以微量元素Fe和Mn的效果最差,尤以Fe对孢子萌发率的效果最差,它明显使得孢子萌发率低于其他微量元素。4.2培养条件对孢子质量指标的影响由图7和8可知,和孢子所需的营养因子一样,孢子的培养条件也明显影响孢子的质量指标,就含孢量而言,培养温度为20~25℃对提高孢子含孢量有明显地效果,尤以20℃(C2)为最好,在该温度下,孢子含孢量达到3.30×1011/g,15℃和30℃对提高孢子的含孢量很不利,培养环境中的pH值对孢子含孢量影响也很大,孢子含孢量达到较高水平的pH值在7(E3)左右
7、,此时孢子含孢量达到2.91×1011/g;就萌发率而言,温度和pH值对其影响的趋势差不多,都在因素2即温度为20℃(C2)、pH在6(E2)达到最高,分别为94.53%和89.63%,温度在15℃、pH在8左右萌发率最低。4.3五个因素对孢子质量指标的综合影响碳源(A)、氮源(B)、温度(C)、Ph(D)及微量元素(E)五个因素对球孢白僵菌孢子含孢量和萌发率的影响可见表2,就含孢量而言,五个因子中,温度的极差值最大,为1.67,其次是碳源和pH值,微量元素的极差值最小,仅为0.90,这说明对含孢量影响最大的因素是温度,其次是碳源和pH值,微量元素对
