乙型肝炎患者外周血t淋巴细胞agnors含量及nk细胞活性相关性

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1、乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞AgNORs含量及NK细胞活性相关性作者：石铭张静韩博石龙【关键词】NK细胞【摘要】目的探讨肝炎患者外周血T淋巴细胞AgNORs含量及NK细胞活性变化。方法对198例肝炎患者及30例正常人进行T淋巴细胞AgNORsNK细胞活性及HBV-DNA含量检测。结果乙肝患者随着病情的加重，T淋巴细胞AgNORs含量逐渐降低，急性肝炎患者NK细胞活性与轻度慢性肝炎之间比较无差异外，与其他各型肝炎比较，差异均有非常显著性（P<0.01），各型肝炎间HBV-DNA含量差异无显著性。肝炎患者体内HBV-DNA含量对T淋巴细胞AgNORs含量、NK细胞活性无影响

2、。结论T淋巴细胞AgNORs含量及NK细胞活性在肝硬化患者中极度降低，可以作为一项监测肝炎患者病情轻重的指标。关键词乙型肝炎AgNORsNK细胞【Abstract】ObjectiveTostudythechangebetphocytecellandNKactivityintheperipheralbloodofhepatitsB.MethodsI1640培养液的瓶中，置37℃培养箱中72h，分离T淋巴细胞并低渗破膜后硝酸染色，以核仁呈淡黄色，AgNORs颗粒呈棕褐色为佳。上机用KL型计算机免疫图像分析系统每例随机检测30个T淋巴细胞核仁银染面积与核面积比例（I・

3、S%），取其平均值为检测结果。（2）HBV-DNA含量检测采用PE5700基因荧光定量诊断系统，报告结果以拷贝/ml表示（试剂为达安基因有限公司）。（3）NK细胞活性采用MTT比色法检测，MTT由瑞士生产，KH562细胞由北京生物所提供，10%SDS液SIGˉMA公司生产。采用密度梯度离心法分离获得PBMC。用培养液调至5×106/ml作为效应细胞，将对数生长期的K502细胞用培养液调至2.5×106/ml作为靶细胞。PG3033A型酶标仪（华东电子管厂出品）测504nmDD值，结果以百分率表示。计算NK细胞毒活性公式:｛靶细胞-（实验孔DD-效应细胞DD）｝×100%靶细胞

4、1.3统计学方法检验结果以ˉx±s表示，用SPSS8.0软件，以t检验作为显著性检验。2结果2.1各型肝炎患者外周血T淋巴细胞AgNORs含量、NK细胞活性与HBV-DNA含量之间的比较急性肝炎45例，年龄25～51岁，平均（27±10.9）岁。轻度慢性肝炎39例，年龄19～82岁，平均（41±12.9）岁。中度慢性肝炎52岁，年龄31～67岁，平均（43±11.3）岁。重度慢性肝炎21例，年龄43～83岁，平均（52±10.4）岁。结果显示，急性肝炎T淋巴细胞AgNORs含量与轻度、中度、重度慢性肝炎之间比较，差异有非常显著性（P<0.01）。见表1。急性肝炎患者NK

5、细胞活性除与轻度慢性肝炎之间比较无差异外，与其他各病理分级相比较，差异均有非常显著性（P<0.01），各型肝炎间HBV-DNA含量差异无显著性。表1外周血T淋巴细胞AgNORs含量、NK细胞活性与HBV-DNA含量之间的比较2.2不同病毒含量对外周血T淋巴细胞AgNORs含量、NK细胞活性的影响HBV-DNA病毒含量按103～104、104～105、105～106、>106进行分级，分别与T淋巴细胞AgNORs含量、NK细胞活性相比较，差异无显著性（P>0.05），说明肝炎患者体内HBV-DNA含量对T淋巴细胞AgNORs含量、NK细胞活性无影响。见表2。表

6、2不同病毒含量对外周血T淋巴细胞AgNORs含量、NK细胞活性的影响2.3肝硬化组与对照组之间T淋巴细胞AgNORs含量、NK细胞活性比较肝硬化与对照组T淋巴细胞AgNORs含量、NK细胞活性相比较发现，肝硬化组T淋巴细胞AgNORs含量及NK细胞活性明显降低，说明肝炎患者晚期由于病情的加重，抑制了T淋巴细胞的增殖，极大的影响T淋巴细胞的活性，引起机体免疫功能低下或紊乱，导致肝癌的发生。见表3。表3肝硬化组与对照组之间T淋巴细胞AgNORs含量、NK细胞活性比较3讨论T淋巴细胞亚群在细胞免疫乃至整个免疫系统中有着重要的地位。以往由于检测手段的局限性，对T淋巴细胞亚群的检测主要

7、通过流式细胞仪或酶标法对其进行分群，如计数CD3+CD4+CD8+的数量，通过计算CD4+/CD8+比值的高低来间接反映机体的免疫状态，并不能反映出T淋巴细胞本身活性的高低。T淋巴细胞核仁形成区嗜银蛋白（AgNORs）是核仁中可被银染的酸性非组蛋白，它可以与组蛋白特异性结合，解除组蛋白对rDNA转录的抑制作用，从而促进rDNA转录生成rRNA，rRNA是核蛋白体的重要成分，保证蛋白质顺利合成。因此AgNORs含量的高低可以反映rRNA活性的高低，rRNA的转录活性又与细胞内蛋白质合成能力密切相关，蛋白质