mirna技术详述

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1、......miRNA技术详述日期：2012-04-26来源：未知作者：网友点击：730次摘要：miRNAs是一类重要的内源性小的非编码RNA分子，大约由21-25个核苷酸组成。miRNA通常靶向一个或者多个mRNA，通过抑制翻译或降解靶标mRNAs而调节基因的表达。人类基因组中大约存在超过1000条miRNA，其在多种人体细胞类型中大量表达，估计其调节超过60%的哺乳动物基因。找产品，上生物帮>>>>相关专题解读miRNA（MicroRNA）引述精准的基因表达调控对生物体的生长发育和功能至关重要。过去对基因表达调控的研究主要集中

2、在转录因子介导的基因转录调控方面(激活或抑制基因转录)。而RNA一度被认为是DNA和蛋白质之间的“过渡”，但越来越多的证据清楚的表明RNA在生命的进程中扮演的角色远比早前的设想重要，晚近发现一系列小分子非编码RNA(smallnoncodingRNA)，包括miRNA(microRNA)，siRNA(smallinterferingRNA)，piRNA(piwi-interactingRNA)和esiRNA(endogenoussiRNA)等，这些小RNA组成了RNA调控网络，在转录水平、转录后及表观遗传等水平控制基因的表达，参与

3、调控包括细胞增殖、分化和凋亡等进程，影响着生物体的生长发育和多种病理过程。小RNA的发现也揭示了真核生物全新的基因表达调控方式。miRNAs是一类重要的内源性小的非编码RNA分子，大约由21-25个核苷酸组成。miRNA通常靶向一个或者多个mRNA，通过抑制翻译或降解靶标mRNAs而调节基因的表达。人类基因组中大约存在超过1000条miRNA，其在多种人体细胞类型中大量表达，估计其调节超过60%的哺乳动物基因。miRNA在植物界和后生动物界间表现不同的特性。在植物中，miRNA与其靶基因通过近乎完美互补的方式相结合;而在后生动物中

4、，经常是一条miRNA可以和靶基因的多个位点相结合，或是一条miRNA调节多种靶基因。另外,在后生生物中，miRNA靶位点位于mRNA的3’UTR，而在植物中，miRNA靶位点可以位于3’UTR，更多情况下是位于mRNA的编码区内。第一个miRNA在上世纪九十年代被发现，直到本世纪初才认识到这是一类在功能上保守的生物调节因子。在此时起，miRNA研究揭示其存在不同基因表达负调控形式，包括转录本降解和扣留(sequestering)，翻译抑制等，并可能参与了对基因表达的正调控(转录和翻译活化作用)。总之，在不同形式的细胞和组织类型中

5、发现了不同的miRNA表达形式，miRNA可能参与了多数生理过程;并且在多种病理状态下，miRNA呈现异常表达，这些异常表达miRNA在疾病发生、发展和转归中发挥了重要作用，当前，基于miRNA的治疗方式研究当前正在进行中。............miRNA的发现历史miRNA是由VictorAmbros,RosalindLee和RhondaFeinbaum等人在研究lin-14基因在调节线虫发育中作用时发现的。他们发现LIN-14蛋白丰度受到一个由lin-4编码的短RNA产物的调节，来自lin-4基因的61个核苷酸前体生成一个2

6、2个核苷酸的RNA，该RNA含有与lin-14mRNA3’UTR部分互补的序列。这种互补特性为抑制lin-14翻译生成LIN-14蛋白的充分必要元件。然而在当时，lin-4却被认为是线虫中特有的现象而被忽视。直到2000年，第二个小RNAlet-7被发现，let-7可以抑制lin-41,lin-14,lin-28,lin-42和daf-12等在发育转型中发挥重要作用基因的翻译。很快又发现let-7在多个物种间保守存在，表明在更广泛的生物物种中存在这种调节。miRNA的命名术语当前，发展了一套标准的miRNA命名系统，前缀mir后紧

7、跟“-”和相应数字，数字通常显示名字的先后次序。而小写的mir-指pre-miRNA，如果使用大写的miR-则指成熟的miRNA。对于差别只有一到两个核苷酸的近似相同的miRNA，在命名时通常另外添加一个小写字母，例如miR-200a和miR-200b。为了区分物种来源，通常在miRNA的前面加上三个字母组成的前缀，如人源性的使用has，而绵羊(Ovisaries)来源的使用oar，其他如v表示来自病毒基因组，D表示果蝇源性的等。如果定位于不同基因组位置的前体miRNA可以生成完全一致的成熟miRNA，则通常使用外加的“-”加数字

8、后缀来区别这种情况，例如hsa-mir-194-1和hsa-mir-194-2位于基因组的不同位置，而剪切生成相同的成熟miRNA序列hsa-miR-194。当两个成熟的miRNA来自于相同的前体miRNA的相反的两个臂，则使用“-3p”和“-5p