《mirna技术详述》word版

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1、miRNA技术详述日期：2012-04-26来源：未知作者：网友点击：730次摘要：miRNAs是一类重要的内源性小的非编码RNA分子，大约由21-25个核苷酸组成。miRNA通常靶向一个或者多个mRNA，通过抑制翻译或降解靶标mRNAs而调节基因的表达。人类基因组中大约存在超过1000条miRNA，其在多种人体细胞类型中大量表达，估计其调节超过60%的哺乳动物基因。找产品，上生物帮>>>>相关专题解读miRNA（MicroRNA）引述精准的基因表达调控对生物体的生长发育和功能至关重要。过去对基因表达调控的研究主要集中在转录因子介导的基因转录调控方面(激活或抑

2、制基因转录)。而RNA一度被认为是DNA和蛋白质之间的“过渡”，但越来越多的证据清楚的表明RNA在生命的进程中扮演的角色远比早前的设想重要，晚近发现一系列小分子非编码RNA(smallnoncodingRNA)，包括miRNA(microRNA)，siRNA(smallinterferingRNA)，piRNA(piwi-interactingRNA)和esiRNA(endogenoussiRNA)等，这些小RNA组成了RNA调控网络，在转录水平、转录后及表观遗传等水平控制基因的表达，参与调控包括细胞增殖、分化和凋亡等进程，影响着生物体的生长发育和多种病理过程

3、。小RNA的发现也揭示了真核生物全新的基因表达调控方式。miRNAs是一类重要的内源性小的非编码RNA分子，大约由21-25个核苷酸组成。miRNA通常靶向一个或者多个mRNA，通过抑制翻译或降解靶标mRNAs而调节基因的表达。人类基因组中大约存在超过1000条miRNA，其在多种人体细胞类型中大量表达，估计其调节超过60%的哺乳动物基因。miRNA在植物界和后生动物界间表现不同的特性。在植物中，miRNA与其靶基因通过近乎完美互补的方式相结合;而在后生动物中，经常是一条miRNA可以和靶基因的多个位点相结合，或是一条miRNA调节多种靶基因。另外,在后生生物

4、中，miRNA靶位点位于mRNA的3’UTR，而在植物中，miRNA靶位点可以位于3’UTR，更多情况下是位于mRNA的编码区内。第一个miRNA在上世纪九十年代被发现，直到本世纪初才认识到这是一类在功能上保守的生物调节因子。在此时起，miRNA研究揭示其存在不同基因表达负调控形式，包括转录本降解和扣留(sequestering)，翻译抑制等，并可能参与了对基因表达的正调控(转录和翻译活化作用)。总之，在不同形式的细胞和组织类型中发现了不同的miRNA表达形式，miRNA可能参与了多数生理过程;并且在多种病理状态下，miRNA呈现异常表达，这些异常表达miRN

5、A在疾病发生、发展和转归中发挥了重要作用，当前，基于miRNA的治疗方式研究当前正在进行中。miRNA的发现历史miRNA是由VictorAmbros,RosalindLee和RhondaFeinbaum等人在研究lin-14基因在调节线虫发育中作用时发现的。他们发现LIN-14蛋白丰度受到一个由lin-4编码的短RNA产物的调节，来自lin-4基因的61个核苷酸前体生成一个22个核苷酸的RNA，该RNA含有与lin-14mRNA3’UTR部分互补的序列。这种互补特性为抑制lin-14翻译生成LIN-14蛋白的充分必要元件。然而在当时，lin-4却被认为是线虫

6、中特有的现象而被忽视。直到2000年，第二个小RNAlet-7被发现，let-7可以抑制lin-41,lin-14,lin-28,lin-42和daf-12等在发育转型中发挥重要作用基因的翻译。很快又发现let-7在多个物种间保守存在，表明在更广泛的生物物种中存在这种调节。miRNA的命名术语当前，发展了一套标准的miRNA命名系统，前缀mir后紧跟“-”和相应数字，数字通常显示名字的先后次序。而小写的mir-指pre-miRNA，如果使用大写的miR-则指成熟的miRNA。对于差别只有一到两个核苷酸的近似相同的miRNA，在命名时通常另外添加一个小写字母，例

7、如miR-200a和miR-200b。为了区分物种来源，通常在miRNA的前面加上三个字母组成的前缀，如人源性的使用has，而绵羊(Ovisaries)来源的使用oar，其他如v表示来自病毒基因组，D表示果蝇源性的等。如果定位于不同基因组位置的前体miRNA可以生成完全一致的成熟miRNA，则通常使用外加的“-”加数字后缀来区别这种情况，例如hsa-mir-194-1和hsa-mir-194-2位于基因组的不同位置，而剪切生成相同的成熟miRNA序列hsa-miR-194。当两个成熟的miRNA来自于相同的前体miRNA的相反的两个臂，则使用“-3p”和“-5

8、p”后缀(过去曾使用s和as表示，分别