多色荧光原位杂交技术检测急性淋巴细胞白血病复杂核型异常

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1、多色荧光原位杂交技术检测急性淋巴细胞白血病复杂核型异常作者：李建勇，马力，肖冰，潘金兰，仇海荣，吴亚芳，温丙昭，薛永权【摘要】本研究建立多色荧光原位杂交（M-FISH）技术平台，探讨其在检测急性淋巴细胞白血病（ALL）复杂核型异常中的应用。联合应用常规细胞遗传学方法和M-FISH技术分析了5例伴有复杂核型异常的ALL患者。结果表明：M-FISH证实了原有的异常t(9；22)、t(1；19)和t(y；1)，同时还发现了新的异常der(1)(1∷3∷7)、der(6)t(6；9)(q?；p13)、der(1)t(1；11)、der(1

2、2)t(1；12)、der(3)t(3；5)、der(2)t(2；16)、der(9)(9∷18∷7)和der(7)(9∷18∷7)，并且纠正了原有的错误分析，其中der(9)(9∷18∷7)及der(7)(9∷18∷7)为世界上首例报道。结论：M-FISH在检测ALL复杂核型中的应用前景广阔，是进行精确染色体核型分析所不可缺少的先进手段。【关键词】多色荧光原位杂交　　DetectionoftheplexChromosomalAberrationsinAcuteLymphoblasticLeukemiabyMeansofMulti

3、plexFluorescenceinsituHybridization　　AbstractThisstudyedtoestablishthetechniqueofmultiplexfluorescenceinsituhybridization(M-FISH)andtoexploreitsusefulnessindetectionofplexchromosomalaberrations(CCAs)inacutelymphoblasticleukemia(ALL).FiveALLpatientsonstratedthatM-FISHc

4、onfirmedtheaberrationspreviouslydetectedbyCC，suchast(9；22)，t(1；19)andt(y；1)，andrevealednealitiesasder(1)(1∷3∷7)，der(6)t(6；9)(q?；p13)，der(1)t(1；11)，der(12)t(1；12)，der(3)t(3；5)，der(2)t(2；16)，der(9)(9∷18∷7)andder(7)(9∷18∷7)，andalsocorrectedtheongtheseabnormalities，der(9)

5、(9∷18∷7)andder(7)(9∷18∷7)e.Inconclusion，M-FISHhasprovedtobeusefulincharacterizationoftheCCAsinALL，anditisanessentialmethodtorefinethekaryotypeanalysis.　　Keyultiplexfluorescenceinsituhybridization；acutelymphoblasticleukemia；plexchromosomalaberration　　伴随血液系统疾病-FISH）技术［1

6、］则可以有效的解决上述难题。M-FISH技术在国外开展应用相对较多，但国内仅有赵萌等［2］应用M-FISH技术检测了2例急性白血病患者的核型异常。　　我们应用M-FISH技术对5例伴有复杂核型异常（plexchromosomalberrations，CCAs）的急性淋巴细胞白血病（acutelymphoblasticleukemia，ALL）病例进行了检测，以探讨该技术在检测ALL复杂核型异常中的应用。　　材料和方法　　研究对象　　5例ALL患者，男4例，女1例，诊断和分型根据细胞形态学、细胞化学染色、多参数流式细胞术免疫分型和染

7、色体核型分析确定，出现的染色体异常累计2个以上染色体和（或）3个以上断裂位点。１例正常男性作为对照。　　细胞遗传学分析　　采用骨髓短期培养法，按常规制备染色体。应用R显带技术进行核型分析，核型异常按《人类细胞遗传学国际命名体制（IS）1995》加以描述。　　M-FISH分析　　M-FISH探针为Vysis公司提供，以联合标记的方式共标记SpectrumAquaTM、SpectrumGreenTM、SpectrumGoldTM、SpectrumRedTM、SpectrumFRedTM5种荧光素，用SpectraVysion分析系统分

8、析可得出24种不同的色彩分别标记于每一条染色体上。M-FISH的具体步骤①取出储存于-20℃的染色体标本，气干法滴片，自然干燥后放入37℃2×SSC中老化30分钟；②分别用RNA酶、胃蛋白酶及甲醛消化处理玻片，具体时间随玻片上细胞多少及胞浆多少而定