spehplc法测定小柴胡片中柴胡皂苷a的含量

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1、SPEHPLC法测定小柴胡片中柴胡皂苷a的含量【摘要】目的建立小柴胡片中柴胡皂苷a的含量测定方法。方法采用HPLC法，以固相萃取进行样品前处理，以Kromasil5C18（250mm×4.6mm，5μm）为色谱柱；以甲醇水（体积比75∶25）为流动相；检测波长为203nm。结果柴胡皂苷a的线性关系良好，回归方程：A=358.09m-7.6102，r=0.9991；平均加样回收率98.2%，RSD为1.92%。结论采用固相萃取能够有效消除杂质对柴胡皂苷a含量测定的影响；本法操作简便，重复性好，回收率高，可作为

2、小柴胡片质量控制的有效方法。【关键词】小柴胡片；柴胡皂苷a；高效液相色谱法；固相萃取　　柴胡片收载于中国药典2005年版一部中，由柴胡、半夏、黄芩等七味药组成，具有解表散热、疏肝和胃之功效，用于治疗外感病、邪犯少阳证有较好疗效。中国药典中以黄芩、甘草的TLC鉴别和黄芩苷的含量测定来控制本品的质量［1］，而对于本品中的君药，用量最大并起主要作用的柴胡却没有质量控制指标。　　柴胡中柴胡皂苷a具有抗炎、调节免疫等作用［2］，是小柴胡片治疗外感病，邪犯少阳证的物质基础。因此，建立本品中柴胡皂苷a的含量测定方法，有助于更

3、好的控制本品的质量。但柴胡皂苷a的紫外吸收波长在203nm，处于紫外末端，在测定时受杂质干扰严重。固相萃取（SPE）是一种新的样品前处理技术，近年来已经应用于中药含量测定方法研究［3-5］，但还未见有将此方法应用于柴胡皂苷a的含量测定的　　2.6重复性试验　　取同一批号（070102）样品6份，按“2.3”项下制备成供试品溶液，进样测定，结果6份供试品含量的RSD为1.04%。表明本法的重复性良好。　　2.7加样回收试验　　取已知含量的小柴胡片粉末6份，按照供试品中柴胡皂苷a的量与对照品加入量1∶1的比例加入柴

4、胡皂苷a对照品，分别制备供试品溶液，注入液相色谱仪，测定。以实测值与对照品加入量计算回收率。结果6份供试品的平均回收率为98.24%，RSD为1.92%，见表1。表明本方法回收率良好。　　表1柴胡皂苷a加样回收试验结果（略）　　Tab.1RecoverytestofSaikosaponiaa　　2.8样品测定　　取3批样品，照“2.3”项下制备成供试品溶液后，测定。结果3个批号070102、070205、070408样品所测得的柴胡皂苷a含量分别为0.38、0.51、0.69mg/片。　　3讨论　　3.1小柴胡

5、片处方中有黄芩、党参、甘草等药材，既含有大量水溶性杂质，又含有较多的亲脂性杂质。在提取柴胡皂苷a提取时也会提取出很多杂质，干扰测定结果的准确性。本文采用与液相色谱柱填料相近的C18小柱进行固相萃取，分别以水洗脱，除去水溶性杂质,再以80%(体积分数）甲醇洗脱柴胡皂苷a，而将大量的亲脂性杂质保留在小柱上，从而有效地除去杂质的干扰，保证了测定结果的准确性。　　3.2C18SPE小柱有100mg/3mL，500mg/3mL等多种规格。本文考察了100mg/3mL与500mg/3mL两种规格对含量测定的影响，结果采用1

6、00mg/3mL小柱时，供试品的回收率只有72%左右，而采用500mg/3mL小柱时，回收率达到98.24%。可见，SPE小柱的吸附容量会影响含量测定结果的准确性。可能是由于样品中杂质的竞争性吸附导致柴胡皂苷a在100mg/3mL小柱上吸附不完全，而500mg/3mL小柱由于吸附容量增大，能够完全吸附柴胡皂苷a，所以后者的回收率要明显高于前者。提示在采用SPE小柱进行样品前处理时，要充分考察吸附容量对含量测定的影响。　　3.3从本文结果看，不同批次小柴胡片中柴胡皂苷a的含量相差较大。据