霉酚酸对树突状细胞延长移植肾存活效应的影响

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1、霉酚酸对树突状细胞延长移植肾存活效应的影响作者：李杰，张银甫，黄赤兵，范明齐，王平贤，冯嘉瑜，肖亚[摘要］目的探讨霉酚酸(mycophenolicacid,MPA)对树突状细胞（dendriticcells,DC）延长移植肾存活效应的影响。方法以BN、Leol/LMPA处理DC于肾移植前72h分别注入受体(组1、组2)，注入供体DC的受体为组3，未注入DC的受体为对照(组4)，观察受体血肌酐变化和移植肾存活时间。结果MPA组DC形态老化延缓，脾细胞对两种浓度MPA处理的DC刺激反应均显著低于对未经MPA处理致耐受DC的刺激反应；与对照相

2、比，组1、组2移植肾存活时间显著延长（P<0.01），其中组2延长更为明显［（76.1±14.6）天vs（8.9±0.8）天，P<0.001］，组3存活时间显著缩短（5.3±0.6天,P<0.05）。术后45天后组2血肌酐水平明显低于组1。结论MPA预处理可降低致耐受DC的抗原提呈能力，提高其延长移植肾存活的效能。　　［关键词］霉酚酸；树突状细胞；肾移植Influenceofmycophenolicacidonsurvivalprolongationofrenalallograftsycophenolicacid(MP

3、A)onsurvivalprolongationofrenalallograftsorphologicallyandfunctionally.TheinfluenceofMPAonthesurvivaltimeandfunctionoftherenalallograftsodelaturationandagingofDCulatingabilityofDCtorecipientspleniccellspairedsignificantlyeofrenalallograftsinCTLA-4Ig-gene-transferredDCgro

4、uppairstheabilityofantigenpresentationofCTLA-4Ig-gene-transferreddonorDCsandenhancesit’sefficacyofsurvivalprolongationofrenalallograftsinrats.［Keyycophenolicacid;dendriticcells;kidneytransplantation树突状细胞（dendriticcells,DC）是介导器官移植排斥反应的重要成分，通过其表面的B7分子与抗原特异性T细胞表面的CD28分子结合所提

5、供的共刺激信号对T细胞的激活起重要作用［1］。前期研究中，本中心采用B7分子阻断剂CTLA-4Ig基因转染供体DC，获得了表达CTLA-4Ig的致耐受DC，延长了移植肾存活时间，但未能实现长期存活。我们观察到CTLA-4Ig基因转染过程中DC迅速老化现象［2］，研究表明成熟DC表达更多的共刺激分子，可能阻碍CTLA-4Ig充分发挥作用［3］。资料显示，霉酚酸(mycophenolicacid,MPA)具有抑制DC成熟的作用［4］。本研究观察了MPA预处理对致耐受DC形态和体外功能的影响，以及其对致耐受DC延长移植肾存活效应的影响，旨在探

6、讨提高致耐受DC效能的方法。1材料与方法1.1实验材料肾移植供体为近交系Brop;D产品；FITC标记的小鼠抗大鼠DC单抗OX62，PE标记的小鼠抗人CTLA-4单抗均为美国Pharmingen产品。MPA购自RocheBioscience，溶于甲醇，4℃放置过夜，过滤除菌后备用。美国Bio-Rad450酶标仪，XTS-6A手术显微镜（江苏镇江中天光学仪器厂）。CTLA-4Ig基因重组的复制缺陷型腺病毒AdvCTLA-4Ig由笔者构建［5］，滴度为5×109pfu/ml。1.2方法1.2.1DC培养根据1.3统计学方法t检验处理各组数据

7、，统计学显著性标准：P<0.05为差异有显著性；P<0.01为差异有非常显著性。2结果2.1DC培养以及CTLA-4Ig的修饰倒置显微镜下观察到，未经处理培养组骨髓细胞分离当天仅有个别DC形态的细胞，培养后第3天开始DC形态细胞逐渐增多，第6～7天出现大量DC形态的细胞并逐渐悬浮，10天后DC出现树突活动逐渐减少、僵直等老化现象。加入MPA后，DC出现树突形态时间无明显变化，但其老化现象延迟，0.05μmol/L和0.1μmol/L浓度组至16～17天后才出现。培养6天后，以流式细胞术检测各孔DC形态悬浮细胞表面标志OX62

8、，阳性率为83.1%～92.6%。各组DC与AdvCTLA-4Ig孵育48h后检测各孔中DC的CTLA-4阳性率为92.9%～96.1%，孵育后3天，两种浓度MPA组DC未见明显老化改变，无MPA组DC出现