花边莲提取液对人肺癌spc

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1、花边莲提取液对人肺癌SPC作者：韦星，万福生，涂硕，余乐涵，杨香生【关键词】花边莲；,,SPC　　摘要：目的探讨花边莲提取液对人肺癌SPCA1细胞凋亡相关基因survivin和caspase3表达的影响。方法采用体外培养人肺癌SPCA1细胞，实验随机分为正常对照组、花边莲处理组（浓度分别为12.5，25和50ml/L）和顺铂（DDp25mg/L）组，半定量RTPCR检测survivin和caspase3mRNA表达水平，二步法免疫组化检测Survivin和Caspase3蛋白表达变化。结果与正常对照组相比，花边莲各浓度组caspase

2、3mRNA和蛋白表达显著上升（P＜0.01），survivinmRNA和蛋白表达明显下降（P＜0.01）。结论花边莲提取液诱导SPCA1细胞凋亡的分子机理可能与上调caspase3基因表达和下调survivin基因表达有关。　　关键词：花边莲；SPCA1细胞；细胞凋亡；survivin;caspase3　　InfluenceofHuaBianLianExtractonExpressionofApoptosisAssociatedGenesSurvivinandCaspase3inHumanLungCancerSPCA1Cells　　A

3、bstract：ObjectiveToinvestigatetheinfluenceofHuaBianLian(HBL)extractonexpressionofapoptosisassociatedgenessurvivinandcaspase3inhumanlungcancerSPCA1cells.MethodsCulturedhumanlungcancerSPCA1cellslydividedintothecontrolgroup(thenegativecontrolgroup),HBL-treatedgroups(12.5,2

4、.5,50ml/L)andDDP(25mg/L)group(thepositivecontrolgroup).Theexpressionofsurvivinandcaspase3mRNAiquantitiveRTPCR.Theexpressionofsurvivinandcaspase-3protEinsmunhistochemicalstaining.ResultsparedRNAandprotEInincreasedsignificanty(P＜0.01),RNAandproteindecreasedmarkedlyinHBLgr

5、oups(P＜0.01).ConclusionThemolecularmechanismofHBLapoptosisinducingofSPCA1cellsmaybeassociated为Promega公司产品，PCR引物为上海生工生物工程公司合成，鼠抗survivin(D8)：sc17779和caspase3(E8)：sc7272单克隆抗体为Santacruz公司产品，Pol水浸泡1h，加热煮沸后小火煎熬60min，室温冷却，120目网筛过滤，弃药渣，滤液离心（3000r/min，20min），2次。取上清液，浓缩至50ml，调pH

6、值为7.0～7.2，0.22μm过滤除菌，获生药含量为2.0g/ml白英水提液，5ml小瓶分装，-20℃保存备用，实验时将含10%胎牛血清RPMI1640培养液稀释至所需的药物浓度。　　1.2.2细胞培养和药物处理SPCA1细胞，以含100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、10%FBS的RPMI1640培养液，在37℃，5%CO2的培养箱中培养，细胞生长至对数增殖期，更换含0，12.5，25，50ml/LHBL新鲜培养液，用DDP（25mg/L）为阳性对照组，药物作用时间为48h。　　1.2.3半定量RTPCR检测survivi

7、n和casapse-3mRNA表达药物处理细胞48h后，收集各组细胞，PBS冲洗两次，按总RNA提取试剂盒的说明书提取RNA。引物借助primerpremier5.0软件设计，并经Genebank验证。survivin引物：Sense：5’TCTCAAGGACCACCGCATCT3’，Anti-sese：5’GGCTCTTTCTCTGTCCAGTTTCA3’，扩增产物长度289bp；caspase-3引物：Sense:5’-GGCTCTTTCTCTGTCCAGTTTCA-3’，Anti-sese:5’ACACTGTGCCCATCTAC

8、GAGG3’,扩增产物长度270bp;β-actub引物：Sense：5’-ACACTGTGCCCATCTACGAGG-3’，Antisense：5'AGGGGCCGGACTCGTCATACT-3'，扩增产物长度621b