不同日龄意蜂工蜂上颚腺10-hda分泌规律研究

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1、不同日龄意蜂工蜂上颚腺10-HDA分泌规律研究蜜蜂工蜂上颚腺分泌的反式-10-羟基-2-癸烯酸(10-hydroxy-2-decenoicacid,10-HDA)是蜂王浆中最特色的功能成分之一。一般认为，作为蜜蜂幼虫和蜂王食物中主要成分之一的10-HDA,主要起到抑菌和营养的作用。BochandShearer(1967)研究发现，工蜂(原文未标明蜂种)头部10-HDA含量随日龄的增加而上升,含量变化为0〜60ug/bee。Plettneretal.(1997)曾报道，西方蜜蜂工蜂10-HDA平均含量为9511g/bee。我国目前饲养的意蜂已经是长期本地驯化的品种，并且高产王浆的

2、意蜂品种已在我国大部分地区推广使用多年，对其工蜂中10-HDA的分泌规律还未见研究，本试验以浆蜂本地驯化后代的意蜂为材料，对不同日龄的意蜂工蜂上颚腺10-HAD分泌规律进行了研究，现报道如下。1材料与方法1.1材料1.1.1蜂群意大利蜜蜂(Apismelliferaligustica)蜂群由福建农林大学蜂学学院教学蜂场提供。1.1.2主要仪器LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津）（色谱柱:4.6mmX285mm不锈钢柱,填充物:不定形硅胶C18键合相、10um）;SHB-lll循环水式多用真空泵（北京博医康实验系统有限公司）等。1.1.3试齐IJ甲醇（色谱纯）;无水乙醇（优级纯

3、）;对羟基苯甲酯，含量99.0%;10-HDA标准品（纯度99.6%）。1.2方法1.2.1意蜂工蜂人工羽化和标记从意蜂群中提取出快出房的封盖子脾，放入35°C，75%〜80%RH的恒温培养箱中培养。羽化当日的蜂部分作为0日龄冷冻保存备用，其余用汕漆笔标记蜜蜂背板、以标记当天记为0日龄，标记后放回3群意蜂群。于标记后的第5、10、15、20天从蜂群中捕捉相应日龄的标记蜂，分别取得5,10,15,20,25,30□龄的工蜂，每日龄约取100只蜜蜂装袋，置冰箱冷冻保存。1.2.2工蜂上颚腺中10-HDA的检测（1）不同日龄工蜂上颚腺10-HDA含量的分泌规律研究。取各口龄工蜂头部5

4、个一组，做5个重复。将5个头部置于研磨器中加少量甲醇充分研磨后，移至10mL容量瓶中、润洗3遍研磨器,加入容量瓶中，定容并摇匀后，置超声波浴中超声15min,然后用0.45um的针式滤器过滤后待测。(2)10日龄工蜂10-HDA分泌规律研究。对来自3群蜂的10日龄工蜂各30只，共90只，对逐个对每个头部按(1)中所述方法进行制样，检测10-HDA含量。⑶10-HDA测定。吸取10-HDA标准溶液ImL,内标溶液2mL、至10mL容量瓶中、再加入甲醇至刻度、摇匀，用于高效液相色谱(HPLC)检测。色谱仪检测条件：波长210nm;流动相(CH30H+0.03mol/LH3PO4+H

5、2O)%=(55+10+35)%、流动相流速ImL/min。用标准品的峰面积，按比例计算样品中10-HDA含量。2结果与分析用HPLC对0、5、10、15、20、25、30日龄意大利蜜蜂工蜂头部10-HDA含量的测量结果如图1所示。由图可知，随口龄增长，工蜂头部上颚腺的10-HDA含量不断升高。尽管BochandShearer(1967)的文中未标明是蜜蜂种类，但推测应为西方蜜蜂的一种。本结果的这种日龄变化趋势与他们的结果相似。检测表明,0日龄工蜂上颚腺的10-HDA含量最低，平均6.72±2.98Ug/bee,即每个上颚腺平均含3.36ug10-HDA;此后，随口龄增长,10

6、-HDA含量逐渐增加;至10日龄后，达到一定高峰，增速趋缓，10、15、20日龄的含量分别为45.20435±6.882246ug/bee,45.3401±11.59839ug/bee、46.05902土7.574184ug/bee;至25日龄时，含量再次有所增加，至30日龄时已是0日龄含量的十几倍,为所测最高值、平均为56.00±15.8ug/bee、范围为33.43ug/bee〜83.4ug/bee。3讨论对蜜蜂上颚腺中10-HDA含量已有不少研究，主要集中于信息素研究角度开展。有报道日龄的A.m.intermissa工蜂上顎腺中10-HDA含量仅有(0.14

7、;0.06)ug(Moritzetal.,2002);室内饲养(无王状态)的0〜4日龄海角蜜蜂(A.m.capensis)工蜂上颚腺10-HDA的含量随日龄增加而增加,0日龄为(0.770.26)Ug,4日龄为(2.830.82)Ug(原文未说明是1个上颚腺还是1对上顎腺的含量)(Simonetal.,2001)。有王群小蜜蜂(Apisflorea)工蜂的10-HDA含量为10.1ug/bee(Keelingetal.，2000)o本试验对有王状态下意蜂工蜂上