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1、水杨酸钠给药对小鼠下丘核NGBmRNA和蛋白表达的影响：尹时华，龚树生，鄢开胜，李穗，陈沛，陈广理【关键词】水杨酸钠 【Abstract】AIM:TostudytheeffectsofsodiumsalicylateontheexpressionofNGBmRNAandproteinininferiorcolliculusneuronsinmice.METHODS:FortyeightKunmingmiceg/(kg・d)］,［300mg/(kg・d)］,and［450mg/(kg・d)］sodiumsalicyla
2、teadministratedgroups(B,C,D).TheexpressionofNGBmRNAeasuredbyusingRTPCRandtheproteinexpressionofNGBeasuredbyBI公司）;TaqDNA聚合酶(生工公司);DL2000Marker(大连宝生物);48只成年健康昆明小鼠18～25g,雌雄不拘(华中科技大学同济医学院动物中心提供）. 1.2方法 1.2.1分组与处理小鼠48只随机分成A,B,C,D四组，每组12只.A：对照组；B,C,D分别为200,300和450mg/(kg・d)水杨酸钠给药组
3、,各组均经腹腔注射给药，A组给以同体积的生理盐水，所有动物自由饮食.给药15d后处死检测. 1.2.2RTPCR检测实验小鼠下丘核区NGBmRNA的表达 1.2.2.1实验小鼠下丘核区总RNA的提取取昆明小鼠下丘核区脑组织100mg移入1.5mLEP管中；加Trizol试剂1mL，混匀，置室温5min；加氯仿0.2mL,摇震15s,置室温2～3min；4℃，10000g离心5min；仔细吸取上层水相，移至另一EP管中；加0.5mL异丙醇,置室温10min；4℃，10000g离心10min；750mL/L乙醇(DEPC水配制)1mL,摇震,充分洗涤沉淀，4℃
4、10000g离心5min；弃上清，中空干燥后沉淀重悬于无Rnase水中-70℃保存备用.以电泳和波长260nm光谱吸收的情况来判定所抽提RNA的质量和浓度. 1.2.2.2cDNA第一链的合成方法将总RNA0.1～5μg,oligol(dT)8引物（5μg/mL）1μL加无Rnase水至12μL轻轻混匀，依次加入EP管,离心3～5s.将混合物置70℃5min.置冰上冷却并离心（短暂）.将EP管置于冰上，依次加入试剂5×Buffer4μL,Rnase抑制剂（20U/μL）1μL,10mmol/LdNTP2μL.37℃孵育5min；加入逆转录酶（200U/μL）
5、1μL42℃孵育60min；70℃加热10min,冰上冷却，-70℃保存备用. 1.2.2.3扩增引物合成和PCR反应条件及体系扩增引物由上海生物工程技术服务有限公司合成，引物序列如下：NGB(615bpGenbankaccessionnumberBC024263)上游：5′CTAGTCGACGAGATGGCGCTGCAT3′下游5′CGCGGATCCACTACAACAGGCAGATCAAC3′,扩增片段615bp.βactin上游：5′GACGATGATATTGCCGCACT3′下游:5′GATACCACGCTTGCTCTGAG3′扩增片段186bp(Ge
6、nbankaccessionnumberAB117093). PCR反应体系包括：ddH2O35μL，MgSO4buffer5μL，2mmol/LdNTP5μL，P11μL，P21μL，Template2μL，Taq酶1μL.将其混匀，短暂离心30s.94℃预变性4min，94℃30s，55℃1min45s，72℃2min，循环30次，72℃延伸5min.取2μLPCR产物经12g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定. 1.2.3in，室温摇动.滴加化学发光试剂，X光片感光（感光胶片为Kodak产品）. 统计学处理:所有数据以x±s表示，采用SPSS11.5统计软件进
7、行单因素方差分析，P<0.05认为有统计学差异. 2结果 2.1RTPCR检测实验小鼠下丘核区NGBmRNA的表达结果NGBmRNA表达的检测结果见Fig1和Tab1.从Tab1可见小鼠下丘核区NGBmRNA表达对照组明显高于三个水杨酸钠给药组（P<0.01）；三个水杨酸钠给药组NGBmRNA表达比较以D组最低，B组表达最高，且明显高于C组（P<0.05）和D组（P<0.01），C组与D组比较有显著性差异（P<0.05）.表1水杨酸钠给药对小鼠下丘核NGBmRNA和蛋白表达的影响（略） NGB在脑缺氧的适应性保护过程中起重要
8、作用［9］，同时NGB可增加神经细胞的
