中药研究与开发

《中药研究与开发》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、中药研究与幵发【摘要】目的研宄大黄中5种羟基蒽醌对金黄色葡萄球菌的抑菌作用。方法采用pH梯度萃取法从大黄中提取出蒽醌成分，采用体外实验及二分法测定各成分的抑菌效果。结果大黄中大黄素、芦荟大黄素、大黄酸有抑菌作用，大黄酚与大黄素甲醚无抑菌作用。抑菌效果大黄素最好，芦荟大黄素次之，大黄酸最差。结论大黄具有抑菌作用。【关键词】大黄；金黄色葡萄球菌；二分法Abstract:ObjectiveTostudytfivefreeanoccusaureuextractedbctonrestraectionmetheinhastheeyrsophano

2、lstrainingbingbacteriemodin,rhethraquinons.MethodToypHgradeseiningbacteod.ResultEffectofresandphyscioacterium.0um,emodiniinistheworesofrheumotalanthraqxtraction,riumwasmeamodin,aloetrainingbanhasnottheftheeffectsthebest,tst.ConclutheeffectofnStaphylocuinoneswasandtheeff

3、esuredbybis-emodin，rhcterium，cheffectofreonrestrainhenisaloe-ionRheumhastheeffectofrestrainingbacterium.Keywords：rheum；staphylococcusaureus；bisectionmethod现代药理石开究证明，大黄具有抗菌、抗肿瘤、降低血压、健胃、利胆、保肝、强心、延缓衰老、调节免疫功能等作用。大黄中含有的最主要的5种羟基蒽醌是：大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚。本实验主要通过对这5种羟基蔥醌的提取、分

4、离及对金黄色葡萄球菌的抑菌效果进行比较，旨在为大黄在抗菌方面的应用提供一定的实验依据。1实验材料大黄购于沈阳中街新药特药，金黄色葡萄球菌Staphy-lococcusaureus209P购于辽宁省药品检验所。2方法与结果大黄总蒽醌的提取[1]称取25g的大黄粗粉，置于圆底烧瓶中，先加入50mL的20%硫酸，再加入125mL的氯仿，75°C回流4h。游离蔥醌的分离[2]本实验采用pH梯度萃取法进行分离。氯仿总提取液50mL，加pH8的缓冲液17mL，振摇，静置，缓冲液层加盐酸酸化至PH3,静置，沉淀，抽滤得大黄酸，用冰醋酸重结晶得大黄酸

5、精品。剩余氯仿层加pH的缓冲液mL，振摇，静置，缓冲液层加盐酸酸化至pH3，静置，沉淀，抽滤得大黄素，用冰醋酸重结晶得大黄素精品。剩余氯仿层加pH13的缓冲液60mL，振摇，静置，缓冲液层加盐酸酸化至PH3,静置，沉淀，抽滤得芦荟大黄素，用冰醋酸重结晶得芦荟大黄素精品。剩余氯仿层回收氯仿，得大黄酚与大黄素甲醚混合物。提取物溶液的配制将各提取物用其相应的缓冲液配制成浓度6mg/niL的溶大黄中5种游离蒽醌抑菌作用的检验培养基的制备牛肉浸膏%，酵母浸膏%，蛋白胨%，葡萄糖%，琼脂%，pH〜，常水配制。操作过程制备50mL培养基灭菌30mi

6、n。在超净工作台上，先倒出30mL至培养皿中，再于50°C左右向另外20mL培养基中迅速加入mL菌悬液，混匀，倒入同一个培养皿中。待培养基凝固后，分别点上5uL、浓度为6mg/mL的各提取物溶液。在37°C恒温培养箱中培养10h，然后进行美蓝染色。量取100mL95%乙醇，加浓盐酸1滴，即为酸性乙醇。量取100mL95%乙醇，加氢氧化钠2g，振摇，待溶解后即为碱性乙醇。取美蓝溶液20mL倒入平板中，用三角耙涂匀，2min后倾去，倒入酸性乙醇20mL,2min后倾去，倒入碱性乙醇20mL,2min后倾去。细流自来水冲洗3min，倾去并吸

7、干浮水，快速贴上滤纸1张，用三角紀赶走气泡，lOmin后揭下滤纸，晾干。5种游离蒽醌抑菌圈直径：大黄酸为5mm，大黄素为9mm，芦荟大黄素为3mm，大黄酚与大黄素甲醚混合物为0mmo二分法测定各提取物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度[3]准备16支试管，其中1支作为空白对照组，其余15支平均分成3组，分别代表3种不同的成分，每组分成I、II、III、IV、V号，并用记号笔标明。然后用相应的缓冲液配制成不同浓度的提取物溶液，向试管中加入培养基（配方与相同，但不加琼脂），将培养基与提取物溶液充分混合后，灭菌最后在超净工作台上分别向3组试管中

8、（除空白对照组）分别加入金黄色葡萄球菌菌悬液。具体加入量见表1〜表3。培养24h酸的II、III、IV、V号试管全部长菌，只有I号试管没有长菌；芦荟大黄素的情况与大黄酸一样，只有I号试管没有长菌。大黄素的抑菌作用最好，I