survivin和cox

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1、Survivin和COX【关键词】移行膀胱癌；Survivin；COX-2　　　Abstract:ObjectiveToexploretheexpressionofSurvivinandCOX-2inhumanbladdertransitionalcellcarcinoma(BTCC)andthebiologicalsignificance.MethodsImmunohistochemicalS-PmethodandRT-PCR、albladdermucosa.ResultsTheexpressionoftheSurvivinandCOX-2inhumanBTCCalbladdermucosa

2、(P＜0.01).Thereongdifferentclinicalstages(P＜0.05).ThesignificantdifferenceintheexpressionofSurvivinandCOX-2amongthedifferentpathologicalgradess；survivin；COX-2膀胱移行细胞癌(BTCC)的浸润和转移进程复杂，与多种癌基因和抑癌基因的表达、调控以及细胞凋亡有关。Survivin基因是近年来发现的凋亡抑制基因；COX-2基因是与抑制肿瘤转移相关的基因，它们对多种肿瘤的转移有调控作用。本研究应用SP免疫组化方法和RT-PCR检测了40例膀胱癌和10

3、例正常膀胱组织标本的Survivin和COX-2的表达，探讨其表达与BTCC临床分期、病理分级的相互关系，为临床正确估计预后和治疗提供依据。　　1材料与方法　　1．1研究对象宁夏医学院附属医院泌尿外科2006年1月—2006年12月电切和开放手术治疗的BTCC患者40例，其中男20例，女20例，年龄31～80岁，平均62岁。经尿道膀胱肿瘤电切(TURBt)20例，膀胱部分切除10例，膀胱全切10例。病理分级按标准，其中T1期12例，T2期15例，T3期13例。组织学分类：40例均为BTCC。从10例行开放手术的前列腺增生(BPH)患者取膀胱组织标本作对照。　　1．2染色方法所有标本均经10%的

4、多聚甲醛固定、石蜡包埋并进行连续超薄切片，分别作苏木精2伊红(HE)染色、免疫组织化学SP染色。所有标本均由两位病理学专家确诊。所有一抗均购自Maixin公司，SP试剂盒由福州迈新生物技术开发有限公司提供。所有操作严格按试剂盒说明进行。石蜡切片脱蜡，水化后行免疫组织化学染色。抗体工作浓度Survivin为1∶100，COX-2为1∶200，最后用二氨基联苯氨(DAB)染色，苏木精复染。以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照，已知阳性标本作为阳性对照，阳性标本显色后，立即全部终止反应。　　1.3结果判断Survivin、COX-2阳性表达为胞浆成棕黄色。在切片阳性细胞区随机挑选10个高倍视

5、野共计数1000个肿瘤细胞，按照文献［1］方法，在高倍镜下对染色作如下评分：①染色深浅：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；②染色细胞计数：没有细胞染色为0分，1%～10%为1分，11%～33%为2分，34%～66%为3分，＞66%为4分。两项结果相加＜2分为阴性(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～5分为中度阳性(6)，6～7分为强阳性(7)。　　1.4RT-PCR检测Survivin、COX-2mRNA的表达分别收集培养的各组细胞，按Trizol试剂盒说明书提取总RNA，取1μg总RNA反转录合成cDNA，再取20μL反转录产物进行PCR循环。Survivin引物序列：上

6、游5′-ACAACCAAACCTCACACTACTG-3′，下游5′-ATAGATCCCATTACAGACAGCG-3′。COX-2引物序列：上游5′-GGATTTTTATTTAAGAGGAGTAGGT-3′，下游5′-CTACCAAAATTTTTATTATAATCCC-3′。Survivin产物长度439bp，COX-2产物长度468bp，94℃变性1min，60℃复性30s，72℃延伸40s，共35个循环，末次循环72℃延伸10min。GAPDH引物序列：上游5′-TCACCATCTTCCAGGAGCGAG-3′，下游5′-TGTCGCTGTTGAAGTCAGAG-3′，产物长度648bp

7、，94℃变性1min，55℃复性30s，72℃延伸40s，共30个循环，末次循环72℃延伸10min。反应结束后取反应产物5μL进行20g/L琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，UVP型凝胶图像分析系统做图，以各组目的基因与GAPDH基因灰度的比值代表Survivin、COX-2mRNA的表达量。　　1.5数据分析各样本测定值以平均值±标准差表示，以统计学软件SPSS11.0进行分析，采用Fisher确