hplc测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量

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1、HPLC测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量黄晓文，谢艳婷，冯嘉欣，谢銮凤【摘要】目的建立夏桑菊颗粒中蒙花苷的测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱：DiamonsilTMC18柱（250mm×4.6mm，5μm，迪马公司）；流动相为甲醇四氢呋喃水(43∶5∶52),检测波长334nm，流速1.0mL·min-1，柱温30℃。结果蒙花苷在0.048～0.959μg范围内线形关系良好，r=0.9999，平均加样回收率为100.7%，RSD为0.86%（n=6）。结论所建立的方法准确，重现性好，灵敏度高,可用于该制剂的质量控

2、制。【关键词】夏桑菊颗粒；蒙花苷；高效液相色谱法　　夏桑菊颗粒收载于《卫生部药品标准》中药成方标准第15册,由夏枯草、野菊花、桑叶3味中药组成，具有清肝明目、疏风散热作用，用于治疗风热感冒、目赤头痛、头晕耳鸣、咽喉肿痛等症。野菊花是本制剂的主要成分之一，蒙花苷是野菊花的特征成分〔1-2〕，文献〔3-5〕报道以高效液相色谱法测定野菊花制剂中蒙花苷含量，主要采用加甲醇超声处理或回流提取的方法，本文根据蒙花苷不溶于水的性质〔6〕，以正丁醇萃取法提取蒙花苷，建立高效液相色谱法测定夏桑菊颗粒中蒙花苷含量的方法，结果准确、灵敏，阴性对

3、照不干扰，为该制剂的质量控制提供依据。　　1仪器与试药　　1．1仪器　　　　日本岛津高效液相色谱仪（LC10Avp溶剂输送泵、SPD10Avp紫外可见检测器、SCL10Avp系统控制器、CTO10ASvp柱温箱）；岛津Lcsolution工作站；日本岛津AUg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为47.95μg·mL-1的蒙花苷对照品贮备液。精密量取3.0mL，置10mL容量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（质量浓度为14.39μg·mL-1）。　　2.1.2供试品溶液　　取装量差异项

4、下的本品，研细，取5g，精密称定，加水45mL使溶解，用以水饱和的正丁醇提取3次，每次正丁醇的用量分别为25、20、20mL，合并正丁醇液；用以正丁醇饱和的水20mL洗涤，洗涤后的水层用以水饱和的20mL正丁醇提取,合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。　　2.1.3阴性对照液　　取处方中除野菊花外的其余成分制成不含野菊花的阴性对照品，按“2.1.2”项下的方法制备野菊花阴性对照溶液。　　2.2色谱条件及系统适应性试验　　　　色谱柱：DiamonsilT

5、MC18柱（250mm×4.6mm，5μm，迪马公司）；流动相∶甲醇四氢呋喃水(体积比43∶5∶52)；流速：1.0mL·min-1；检测波长334nm；柱温为30℃。分别取蒙花苷对照品溶液、供试品溶液和野菊花阴性对照溶液各20μL，按上述色谱条件，注入色谱仪。蒙花苷与样品中相邻色谱峰的分离度大于2.0,理论板数以蒙花苷计算应不低于2500,阴性对照没有干扰。蒙花苷对照品、供试品溶液及阴性对照溶液的色谱图见图1、2、3。　　2.3方法学考察　　2.3.1线性关系考察　　精密吸取0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8

6、.0、10.0mL的蒙花苷对照品贮备液，置10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得质量浓度分别为2.40、4.80、9.59、19.18、28.77、38.36、47.95μg·mL-1的系列对照品溶液。吸取上述系列对照品溶液各20μL，分别进样测定，以峰面积（A）对溶液的质量浓度（ρ）进行回归，得回归方程A=43690ρ-5780，r=0.9999，表明蒙花苷在0.048～0.959μg之间与峰面积线性关系良好。　　2.3.2精密度试验　　取蒙花苷对照溶液20μL，注入色谱仪，连续测定6次，记录峰面积，结果蒙花苷峰面积的

7、平均值为607366，RSD为0.40%,表明仪器精密度良好。　　2.3.3重复性试验　　取同一批号（批号DA11008）的样品6份，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定，6次测定结果的RSD为1.44%，表明本方法重复性好。　　2.3.4稳定性试验　　取同一供试品溶液（批号DA11008），分别在0、2、4、8、12、24h进样20μL，结果峰面积RSD为0.82%，表明供试品溶液在24h内稳定。　　2.3.5加样回收试验　　取已知含量（批号DA11008）的样品粉末约2.5g，共6份，分别精密加入蒙花苷对照

8、品贮备液（质量浓度为47.95μg·mL-1）4.2mL，按“2.1.2”项下方法制备溶液，按上述色谱条件下进样20μL,测定，结果蒙花苷平均回收率为100.7%，RSD为0.86%，结果表明本方法准确可靠。结果见表1。表1蒙花苷回收率试验结果（略）　　2.4样品测定　　取夏桑菊颗粒样品3批，照“2.1