鲍曼不动杆菌泛抗药性及外排泵基因、蛋白基因相关化研究

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1、鲍曼不动杆菌泛抗药性及外排泵基因、蛋白基因相关化研究第一部分鲍曼不动杆菌对常用抗生素敏感性的研究近年来AB耐药性的逐年上升和耐药性快速传播造成AB的的耐药状况日趋严峻，临床实验室中PDR-AB的分离率也越来越高，这些AB不但对常用抗生素耐药，而且一些强效抗生素对其作用也越来越差，给临床医生抗感染治疗带来很大的难题。为了解临床分离AB的耐药情况，本研究拟对临床分离的100株AB采用K-B法和琼脂二倍稀释法测定其对13种临床常用抗菌药物敏感性，筛选PDR-AB，以了解其耐药表型和耐药模式，并进一步探讨某些强效抗生素对泛耐药鲍曼不动杆菌的抗菌效果。抗菌药物敏感性试验是一

2、种用于考察药物抗菌活性的体外实验，一般被用于抗菌药物的初期筛选及对抗菌药物的临床疗效进行预测[12]。通常认为琼脂二倍稀释法的灵敏度要高于纸片扩散法，但是K-B法操作简易方便，因此本研究用K-B法筛选泛耐药菌株，再用琼脂二倍稀释法进一步检测泛耐药株对强效抗生素的敏感性。1材料和方法1.1材料1.1.1标本收集苏州大学附属第一医院2012年3月至2012年6月临床分离的AB共100株（剔除同一病人同部位的重复标本），其中痰64株，咽拭子9株，灌洗液3株，尿7株，血7株，引流液、胆汁、伤口、脑脊液共10株。均经法国生物梅里埃公司VITEKⅡpact及手工法(如41℃温

3、度生长试验等)重新鉴定。本次研究中，标本主要为呼吸道(包括痰、咽拭子和灌洗液，占76％)，鲍曼不动杆菌的科室分布以重症监护室为主(分离率为46％)；提示我们鲍曼不动杆菌以呼吸道感染，院内传播为主，这与文献报道相似[13]。据我院2012年第一、二、三季度的院内检出病原菌分布及药物敏感分析通报显示检出的所有病原菌中AB检出构成比与铜绿假单胞菌几乎持平（12%左右），仅次于大肠埃希菌。本文从2012年3月至6月仅四个月时间共收集到100株标本中有75株为PDR-AB(通常是指对治疗鲍曼不动杆菌感染经验用药全部耐药，但多粘菌素类除外)，提示本院PDR-AB的临床分离率比

4、较高。目前临床治疗多重耐药鲍曼不动杆菌常选择联合舒巴坦的复合制剂如头孢哌酮-舒巴坦、氨苄西林-舒巴坦等。通常的理念认为舒巴坦本身的抗菌活性很弱，是不可逆的、竞争型β-内酰胺酶抑制剂，通过竞争β-内酰胺酶的活性中心的丝氨酸抑制β-内酰胺酶，使联合制剂中的β-内酰胺类药物避免被酶破坏而发挥抗菌作用[14,15]。同时，我院主要革兰氏阴性杆菌药物敏感分析结果也显示AB除了对含酶抑制剂的复合制剂（头孢哌酮-舒巴坦）比较敏感外，对其他抗生素（头孢他啶、头孢吡肟、哌拉西林、哌拉西林-他唑巴坦、丁胺卡那、环丙沙星、亚胺培南）的耐药率几乎都

5、在70%以上。头孢哌酮-舒巴坦的临床疗效虽然目前还比较好，PDR-AB的MIC结果也显示其耐药率仅为21.13%，这很可能与β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦有关，但是接近60%的中介率也让人为之担忧（几何均数为29.3μg/ml，按照标准判为中介）。75株PDR-AB的MIC结果显示多粘菌素B的体外抗菌作用仍是最有效的，MIC结果为全部敏感，与之前文献[16]报道相仿，可能跟多粘菌素的毒性较高，很少被临床医生选用有关；而四环素类抗生素中抗菌作用最强的米诺环素的耐药率也高达59.15%。尽管碳青霉烯类抗生素如亚胺培南等仍是临床治疗的首选，但其药物敏感性和临床

6、疗效正在逐年下降，出现了许多耐碳青霉烯类细菌感染的报道，本次试验中MIC测定的结果显示亚胺培南的敏感率也仅为2.67%（MIC几何均数为25.16μg/ml，按照标准判为耐药），甚至有2株为高度耐药（MIC≥128μg/ml）。当临床遇到PDR-AB对上述所有药物均无效时可考虑选择多黏菌素B进行治疗。本实验对75株多重耐药菌株进行耐药模式的分析，发现主要耐药模式有：1.对试验用抗菌药物全耐药，2.对头胞哌酮-舒巴坦非耐药而对所有其他抗菌药耐药，3.对丁胺卡那敏感而对其他对所有其他抗菌药耐药，或同时对头胞哌酮-舒巴坦非耐药。第二部分鲍曼不动杆菌泛耐

7、药与外排泵基因和外膜蛋白基因相关性的研究主动外排系统是AB的耐药机制之一，介导多种抗生素的耐药性。AB的主动外排系统根据氨基酸同源性可分为5个家族：包括ATP结合盒超家族(ATPbindingcassette，ABC)、耐药节结化分化家族(resistnodulationdivision，RND)、多药及毒性化合物外排家族(multi-drugandtoxicpoundextrusionfamily，MATE)、主要易化子超家族(majorfacilitatorsuperfamily，MFS)和小多重耐药性家族(smallmulti-drugresistance，

8、SMR)[