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时间:2018-10-28
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1、医学免疫学实验指导实验七补体结合实验由长沙达尔镩生物科技有限公司整理【文章介绍】实验是映证理论,对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目,每个实验说明实验目的,实验原理,实验内容方法,实验要求及注意事项,希望广大师生能够从中有所收获。BioRike简介:BioRike(中文简称"博瑞克")是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。BioRike是一家致力于生命科学
2、和生物技术领域的高科技实验室,专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。【实验目的】1.熟悉补体结合试验的原理和方法及其应用。2.了解溶血素单位、补体单位、抗原单位的测定方法,【实验原理】补体结合试验(complementfixationtext,CFT)是在补体参与下,以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统,来检测未知的抗原或抗体的血清学试验。有五种成分参与,分为指示系统和待检系统(已知抗原和未知抗体或已知抗体和未知抗原)。补体用新鲜豚鼠血清。方
3、法是将已知的抗原或抗体与未知标本(可能含相应抗体或抗原)充分混合,再加入补体作用一段时间,最后加入指示系统。若待检系统有相应抗体或抗原,则能形成抗原抗体复合物,从而消耗了补体不出现溶血现象,此为阳性湘反,出现溶血则为阴性。补体结合试验的影响因素较多,正式试验前需对已知成分作一系列滴定,尤其是补体,应选择适宜的量参与反应,避免假性结果。每次试验尚需同时设立多种对照、以作为判断结果可靠性的依据。该法对颗粒性或可溶性抗原均适用,临床上常用于检测某些病毒、立克次氏体和螺旋体感染者血清内的中的抗体,亦可用于某些病
4、毒的分型。—、溶血素单位滴定[材料]1.抗体:溶血素血清。2.抗原:2%绵羊红细胞悬液,3.补体:(1:30)取自豚鼠新鲜血清4.其它:生理盐水、小试管、试管架、吸管、37°C水浴锅。【方法与结果】1.按下表8-1于各试管分别加入不同稀释的溶血素0.2ml及其成分。2.充分混合后置于37°C水浴锅中30分钟,然后观察结果。3.凡最高稀释度的溶血素可呈现完全溶血者为一个单位。举例:上表结果表明,第11管(即1:9600倍稀释)0.2毫升溶血素为一个单位,在溶血反应中常用0.2毫升中含有2个溶血素单位的稀释
5、液。配置时可取1:100倍稀释的溶血素lml加生理盐水47ml。二、补体单位滴定[材料]1.抗体:2单位溶血素。2.抗原:2%绵羊红细胞悬液。3.补体:(1:30)取自豚鼠新鲜血清4.其它:生理盐水、小试管、试管架、吸管、37°C水浴锅。【方法与结果】1.按下表8-2于各试管分别加入1:30稀释液的补体。2.依次加入其他各成分至每管中,37°C水浴一定时间后观察结果,判定补体单位。3.补体单位:凡能使一定量红细胞发生完全溶解的最小补体量,称为1个确定单位。如上表中第3管开始出现溶血现象,因此第3管(0.
6、1ml)所含补体量为1个确定单位。由于在实际应用时补体有一部分损失,故须酌量增加一些,通常取其次高一管补体量称为1个实用单位。在下例中:1个确定单位=0.1ml1:30稀释的补体。1个实用单位=0.12mlL30稀释的补体。1.补体的稀释:若使每0.2ml补体含2个实用单位,可照下法计算。30:2x0.12=X:0.2X=(0.2x30)-?0.24=25即将补体稀释25倍,用0.2ml即可。(三)正交试验的提取液为抗原与其免疫血清正交试验可以做定性的,液可以做定量的。本实验用伤寒杆做定性实验。[材料]
7、1.抗体:1:5稀释的伤寒血清。2.抗原:1:50稀释的伤寒抗原,1:80稀释的痢疾抗原。3.补体:(L25)取自豚鼠新鲜血清。4.指示系统:2单位溶血素,2%绵羊红细胞。5.其它:同预备试验。【方法】按表8-3耐操作o【结果】观察各管溶血情况,记录并分析其意义。[注意事项]1.以细菌作抗原时,应使用细菌的提取液而不用悬液,通常滴定找出最适稀释度。2.血清需56°C30分钟灭活。3.补体性质不稳定,以实验的当天采取效果最好,操作时尽量减少在室温停留的时间。表8-1溶血素滴定(单位:ml)试管号溶血素0.
8、2稀释度补体(1:30)生理盐水2%绵羊红细胞结果11:10000.20.40.2完全溶血21:12000.20.40.2完全溶血31:16000.20.40.2摇匀完全溶血41:20000.20.40.2后置完全溶血51:24000.20.40.2于完全溶血61:32000.20.40.237°C完全溶血71:40000.20.40.2水浴完全溶血81:48000.20.40.2锅中完全溶血91:64000.20.40.230分完全溶血1
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