实验十补体结合反应.doc

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1、实验十补体结合反应目的要求1．以鼻疽补体结合反应为例，了解补体结合反应术式的基本环节。2．能独立运用本血清学反应的知识，作血清学检验。操作步骤一、材料准备（一）溶血素从兽医生物药品厂购买，保存于冰箱中，有效期1年以上，1月之内效价变动不大，1月可以测一次效价。（二）补体从兽医生物药品厂购买冻干补体，保存于冰箱，效价可半月测一次。也可以采3～4只成年雄性豚鼠血，分离血清，混合，保存于冰箱或冷处，24小时内应用。若检查材料多，需大量补体时，不从心脏采血，可由颈动脉放血于培养皿中，待血液凝固后移于冰箱次晨分离血清。如当日采血可直接离心分

2、离血清。将混合的新鲜豚鼠血清，加入NaCl达10％，置于冰箱或冷处，保存期可达数日或1周。（三）绵羊颈静脉采血，盛于预先加玻珠的玻璃瓶中（或加有5％柠檬酸钠水溶液的玻瓶中），然后，将血分盛于离心管中，以每分钟1500～2000转离心10～15分钟，使红细胞下沉，吸弃上清液，加3～4倍生理盐水混合，再次离心，每分钟1500转15分钟。这样经第三次洗涤后，吸弃上清，将下沉的红细胞配成2.5％红细胞悬浮液（或临用前配制）。配制好的红细胞下沉液置5～10℃下保存，24小时内可应用。若发现溶血时需重新配制。（四）鼻疽抗原从兽医生物药品厂购买

3、。（五）标准血清鼻疽阴、阳性血清由兽医生物药品厂购买。（六）被检血清采取被检动物血清。分离血清后，用生理盐水稀释10倍，加热灭能，以破坏其中补体和其中可能含有的抗补体物质。马血清加热至58～59℃，维持30分钟，骡驴血清加热至63～64℃，维持40分钟。（七）生理盐水蒸馏水中加入0.85％化学纯氯化钠，经灭菌后使用。二、预备试验（一）溶血素滴定将溶血素在水浴箱中加热至56℃、30分钟灭能。用生理盐水配成1:100的基础稀释液（0.1ml溶血素加入生理盐水9.9ml），取10个试管，按表10-1作各种稀释度（1:1000～1:500

4、0）。然后另取13支试管，按表10-2加入各成分。第11、12和13管分别为溶血素、补体与生理盐水对照管。摇振均匀，置37℃水浴箱中，10分钟后取出观察结果：若1～7管红细胞完全溶解，8管部分溶解，9～13管不溶解。溶血素的效价为1:3000，即能使红细胞完全溶解的最小溶血素量，称为溶血素的效价，亦称为一个单位。当补体滴定、抗原滴定、正式试验时，均用两个单位的溶血素（减少1倍稀释）。（二）溶血素补体滴定按表10-3加入各成分。混合后置37℃水浴箱中，10分钟后取出检查结果。补体、溶血素、生理盐水三个对照管均为不溶血（表10-3中1

5、2、13、14管）。溶血系补体效价在有两个单位溶血素存在时，于37℃10分钟能完全溶解2.5％绵羊红细胞0.5毫升的最小补体量，为一个溶血系补体单位。溶血系补体效价为溶菌系补体测定提供用量的参考。cultureandentertainmentvenues,fitnesscenters,hasagoodecologicalenvironment,jobsecuritymeasures),theserequirementsareverystraightforward,specificstandards,alsohasacleardir

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