宫颈癌患者与宫颈息肉蛋白质谱的差异分析

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1、宫颈癌患者与宫颈息肉蛋白质谱的差异分析韩云炜范娟吴敬波韩新平王开正李宗衡唐学清(泸州医学院附属医院肿瘤科四川泸州646000)【中图分类号】R737.9【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2012)15-0042-03【摘要】目的探索宫颈癌患者与宫颈息肉的血清蛋白质谱差异，初步探讨其用于宫颈癌诊断的临床价值。方法收集73例宫颈癌患者和39例宫颈息肉的血清标木，随机分为训练组(56例宫颈癌和20例健康人)与测试组(17例宫颈癌和19例健康对照)。采用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOFMS)技术检测所有血清标木的蛋白质谱。用BiomarkerWizard

2、统计软件比较训练组宫颈癌与宫颈息肉对照间的蛋白质谱差异，再用BiomarkerPattern软件筛选出一组差异蛋白构建决策分类树模型以鉴别宫颈癌病例和宫颈息肉病例，最后用测试组对分类模型进行验证。结果宫颈癌患者和对照组血清蛋白指纹图谱共有148个明显表达差异的蛋白峰，筛选质荷比(m/z)为2957、2974、2982、3016、3282、5928、5948、6647、6661的9个蛋白质峰作为标志蛋白(P<0.01)建立人工神经网络诊断模型，利用该模型对宫颈癌癌进行盲法预测，结果表明该诊断模型检测宫颈癌的灵敏度为94.2%,特异度为91.3%。结论宫颈癌与宫颈息肉人群的血清蛋

3、白质谱存在差异，SELDI-TOF-MS技术筛选出的血清差异蛋白有助于宫颈癌的早期鉴别诊断。【关键词】宫颈肿瘤蛋白质组学表面增强激光解析离子化飞行时间质谱血清诊断宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，在全球女性恶性肿瘤中其发病率仅次于宫颈癌，在发展中国家则居首位。统计数据显示，每年全世界范围内宫颈癌新增病例大约49.3万，死亡病例约27.4万，其中80%分布在发展中国家［1］。我国每年新增宫颈癌病例约13万，占全球宫颈癌病例的1/4以上［2］。随着宫颈癌筛查工作的开展，世界范围内宫颈癌发病率普遍下降，但是卫生条件差和经济落后地区宫颈癌发病率仍高于世界平均水平，冋吋宫颈癌患者年轻化的趋势

4、不容忽视。B前仍没奋理想的肿瘤标志物用于宫颈癌的早期诊断，蛋白质组学研究则使实现宫颈癌早期肿瘤标志物的筛査成为可能［3】。为了探索宫颈癌与宫颈总陶的血清蛋白质谱差异，本研宄采用表面增强激光解析离子化飞行吋间质谱（SELDI-TOFMS）技术检测了宫颈癌与宫颈息肉的血清蛋白质谱，比较两组的差异，并筛选差异蛋白构建分类模型，以帮助鉴别宫颈癌患者与。1对象与方法1.1研究对象血清标本在患者入院后未进行任何治疗时采集。来自2010年04月至2011年6月泸州医学院附属医院肿瘤科的宫颈癌患者，均得到病理检查确诊并获得患者的知情同意。共73例，年龄25-78岁，平均年龄46.6岁，中位年龄47

5、岁。中低分化鱗癌46例，高分化鱗癌21例；腺癌6例；临床分期IIA期24例，IIB期38例IIIA期11例（FIGO分期）；所有病例均经临床检查排除重要脏器（心、肺、肝、肾等）疾病。宫颈息肉健康对照组39例血清标本来自志愿者（均签知情同意书），年龄23〜68岁，平均年龄为46.1岁，中位年龄45岁。1.2仪器、软件和试剂美国Sigma公司提供的尿素、乙酸钠、CHAPS（3-环乙胺-1-丙磺酸）、DTT（二硫代苏糖醇）等，美国Ciphergen公司提供的PBSII/C型蛋白质指纹图谱仪、CM10芯片（弱阳离子交换表面芯片）、蛋白质芯片数据采集软件（Proteinsoftware）。1

6、.3方法1.3.1收集处理标本清晨采集受试者空腹静脉血3ml,30min内放于3000r/min离心5min,将分离的血清转入Eppendof管，再次4°C3000r/min离心5min,血清分装50μl每管，冻存于-8（TC冰箱中备用。另取10份正常人血清各0.5ml进行混合，制成混合对照血清，分装后-80°C保存。1.3.2制备样品混合液取96孔细胞培养板,每孔加入10μIU9缓冲液（9MUrea,2%CHAPS,1%DTT)。将冻存血清置于冰上融解后4°C10000r/min离心2min,分出血清加入上述培养板中，每孔5μl，4°C600r/min振荡30m

7、in。加入185μl结合缓冲液(50mmol/LNaAC，pH4.0)，立即混匀。1.3.3上样及洗脱将弱阳离子交换表面芯片(CM10,美国Cipher.gen公司)装入Bioproeessor,每孔加入200μl结合缓冲液，室温振荡洗涤3次，每次5min。甩掉缓冲液，拍于后再加入200μIHPLC水，洗涤2次，快速倾去，拍干。取出芯片，晾干后点加lμICHCA,lOmin后重复一次，晾干后即可上机测量。在不同的CM10芯片上随机选择一个点加入