宫颈癌患者与健康人血清蛋白质谱的差异分析

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1、宫颈癌患者与健康人血清蛋白质谱的差异分析黄建桃(资阳市第一人民医院妇产科四川资阳641300)【摘要】目的：探索宫颈癌患者与健康人群的血清蛋白质谱差异，寻找能够帮助鉴别诊断宫颈癌的候选血清蛋白标志物。方法收集73例宫颈癌患者和56例健康人的血清标木，随机分为训练组(56例宫颈癌和36例健康人)与测试组(17例宫颈癌和20例健康对照)。结果宫颈癌组和健康对照组的血清蛋白质谱存在14个差异显著的蛋白峰，以质荷比分别为3957、4289、4964、5912、8519、8929、9272和21360的8个差异蛋白构建

2、决策树分类模型，鉴别宫颈癌与健康对照组的敏感性为8243(61/4),特异性为83.33(30/36)，准确性为82.73(91/110),结论宫颈癌与健康人群的血清蛋白质谱存在差异，SELDI-TOF-MS技术筛选岀的血清差异蛋白有助于宫颈癌的鉴别诊断。【关键词】宫颈癌；蛋白质组学；血清蛋白质；诊断【中图分类号】R71132【文献标识码】B【文章编号】1003-5028(2013)05-0319-02宫颈癌是全世界女性中发病率仅仅低于乳腺癌而占第二位的恶性肿瘤，宫颈癌每年剥夺了近270000女性的生命，女性

3、占癌症死亡总数的百分之九，成为严重威胁妇女健康的恶性肿瘤。开展宫颈癌的相关基础研究，在宫颈癌中筛查出能够反映其发生、发展和迁移的宫颈癌血清蛋标志物寻找在宫颈癌的诊断和有效的治疗方法的突破口，木文通过血清蛋白质谱的差异来寻找能够帮助鉴别诊断宫颈癌的血清蛋白标志物，现报告如下。1资料与方法11资料：选自2010年11年4月至2012年5月来自资阳市第一人民医院妇产科就诊的宫颈癌患者73例，年龄26〜77岁间，平均年龄456岁，男39例，女34例。1.2方法：①采集处理标本，早晨在患者空腹吋采集静脉血3ml:在30

4、min内将采集的静脉血放入Eppendof管中，然后注入分离的血清，再次在4°C条件下以3000转每分钟离心5分钟，每个管中分装血清50μl并储存于冰箱中准备随吋使用；②制造样品混合液，采用96个孔细胞的培养板，10μIU9缓冲液（9MUrea，2%CHAPS,1%DTT）被放入每个孔中。把冷冻后的血清放在冰上融化至4°C,并以1000转每分钟离心2分钟，经上述方法分离出的血清加入培养板中，每个孔中放入5μl血清，在4°C的温度下以600转每分钟离心30分钟后加入185μl结合缓冲液（

5、50mmol/LNaAC,pH40）,迅速的描晃均匀；③上样及洗脱，Bioproeessor中被加入弱阳离子交换表面芯片（CM10，美国Cipher,gen公司），200μl结合缓冲液被放入每个孔中,在室温条件下将其震荡洗涤3次，每次震荡洗涤5分钟。随机选择一个点在不冋的CM10芯片上加入被混合的对照血清和待测样品按照以上方法进行处理，从而来确定系统误差的大小和数据的重复性［3］。④采集数据，结合在CM10芯片表面的血清蛋白质要用PBSII/C型蛋白质指纹图谱仪进行检测，检测仪器使用Ciphergen公

6、司提供的all-in-one蛋ft质标准分子进行校正，制定仪器的参考数值，系统的质量误差≤01%［2］。⑤分析方法，将患者分为两组，测试组37例（20例健康人和17例宫颈癌），训练组92例（36例健康人36例健康人56例宫颈癌）。比较训练组宫颈癌与健康对照的血清蛋白质谱结果，再次选出一组差异蛋白构建分类模型鉴别宫颈癌与健康对照，最后用分类模型对测试组进行检测，验证模型鉴别宫颈癌的效果；⑥统计学方法，对不冋组相冋质荷比的蛋白质相对含量采用BiomarkerWizard统计软件进行秩和检验，P<O.0

7、50为差异冇统计学意义。2结果宫颈癌与健康对照组的血清蛋白质冇所差异，经SELDI-TOF-MS系统检测得到宫颈癌和健康人血清蛋白质谱。其中，相比健康对照，宫颈癌组有11个蛋白质呈高表达，3个蛋白质呈低表达。用建立的决策分类模型对测试组17例宫颈癌和26例健康对照的血清蛋白质谱进行盲法验证判别，鉴别宫颈癌的敏感性为86.05%(37/43),特异性为65%(13/20)，准确性为7937%(50/63)。3讨论宫颈癌早期无临床症状的太多，人多数的宫颈癌患者前来就诊吋已达中晚期,这样在很大程度上己耽误了治疗。临

8、床上判断宫颈癌要以详细的体质检查为基础，以临床象征为依据，参考内镜检查、X线检查、病理检查、细胞学检查、肿瘤标志物检测等，通过这些方式宫颈癌人多数可以得到明确诊断[4]。采用不断发展的新的相关技术，新的诊断途径及思路，来对高危人群进行筛查，采用SELDI技术对结宫颈癌血清蛋白质的研宄，奋可能发现特异的结宫颈癌诊断的生物学标志[3]。因此为了对宫颈癌的血清标志物提供进一步帮助还要对筛选出的差异蛋白进行