肃肺润肠汤对药物依赖性便秘大鼠大肠杯状细胞、5

《肃肺润肠汤对药物依赖性便秘大鼠大肠杯状细胞、5》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、肃肺润肠汤对药物依赖性便秘大鼠大肠杯状细胞、5.freelpus公司生产。1.3药物①生大黄，由贵阳市同济大药房提供，甘肃省产，生产批号05053001。生大黄溶液的配制;生大黄浸泡12h，绞汁过滤后，装入烧杯，放入40℃的恒温水箱，浓缩至含生药1g/ml，4℃冰箱保存，使用前复温。②肃肺润肠汤的组成：阿胶10g，苏子15g，杏仁10g，枳壳10g，沉香4g，等，贵阳市同济药堂提供，将上述药物按人和动物比例折算用量，配制及保存同生大黄。1.4试剂兔抗5-HT(工作浓度：1∶200，北京中杉金桥生物技术有限公司);羊抗兔IgG和SABC复合物(工作浓度：1∶100，武汉博士德生物工程公

2、司)。2方法2.1造模方法2.1.1动物分组清洁级SD大鼠45只，体质量180～220g，雌性，随机分为对照组(n=15)，模型组(n=15)，治疗组(n=15)，单笼饲养。室温22～25℃，湿度60﹪，噪音50dB。2.1.2模型建立3大鼠适应性饲养3d后称重，造模组不禁食限水，致大鼠形成便秘4，1周后用大黄水溶液灌胃给予治疗5，起始剂量均为20mg∕(100g·d);按每天20mg∕(100g·d)递增，至约半数以上动物出现稀便时，再维持此剂量不变直到稀便消失，使大鼠对药物产生依赖，再逐渐停止限水;同时按20mg/(100g·d)递增，保持半数以上动物出现稀便现象饲养3个月，大黄

3、最终用量320mg/(100g·d)。正常对照组每天以蒸馏水1.5ml/100g灌胃1次。各组连续灌胃6d，停药1d。2.1.3取材及普通组织学标本制备成功建立大鼠药物依赖性便秘模型并经治疗后，颈椎脱臼法将大鼠处死，迅速取结肠近端(离盲肠约1cm)及远端(离肛门约2cm)各一段约2cm，生理盐水冲洗，放置10﹪福尔马林液体中固定，常规梯度酒精脱水，石蜡包埋，HE染色。2.1.4免疫组织化学SABC法按免疫组织化学SABC法进行免疫组织化学染色，显示5-HT免疫反应细胞。主要步骤：切片常规脱蜡至水，室温10%甲醇-H2O210min，正常山羊血清(1∶50)室温下封闭30min，依次滴

4、加兔抗血清4℃孵育过夜，羊抗兔IgG(1∶100)37℃下孵育20min，SABC复合物(1∶100)37℃下孵育20min，DAB-H2O2液显色，苏木精复染细胞核，中型树胶封片。2.1.5细胞记数选取各组大鼠大肠切片，在200×物镜下，每张切片随机选取10个视野，分别记数每个视野内有核阳性5-HT-IR细胞数。2.2治疗方法①模型组，只造模不灌服肃肺润肠汤;②治疗组，在造模完成后再灌服肃肺润肠汤15d;③对照组每天以蒸馏水1.5ml∕100g灌胃1次至实验结束。2.3统计处理所得数据用±s表示，采用t检验，P0.05表示差异显著，P0.01，表示差异非常显著。3结果3.1一般情况

5、在实验过程中，实验各组没有动物死亡。对照组大鼠体胖、行动活跃、精神良好、皮毛润泽、饮食不减，实验后体重、食量随增龄明显高于实验前。模型组大鼠形体消瘦，活动减少，皮毛色泽发黄无光泽且脱落严重，纳差，精神萎靡，造模后体重明显低于造模前，粪便排出量少、质硬，肠道的传输功能减慢。治疗组一般情况较好，粪便排出量增多、质软，肠道的传输功能减慢得到改善。3.2肠道普通组织学HE染色实验各组肠道肠无特殊改变，但模型组肠道肠杯状细胞数量(随机选择10个200×视野，取其平均值)比对照组减少，差异非常显著(P0.01);治疗组杯状细胞数量比模型组增多，差异非常显著(P0.01)，但比对照组也有显著差异(

6、P0.05)。结果见表1。3.3大肠5-HT-IR细胞的光镜免疫组织化学观察光镜下，对照组大肠5-HT-IR细胞经DAE-H2O2显色，可见免疫反应产物呈棕黄色至棕黑色颗粒状存在细胞质内。5-HT-IR细胞主要分布于肠绒毛上皮细胞以及肠腺上皮之间。与对照组比较，模型组5-HT-IR细胞形态分布由黏膜转到黏膜下层，且免疫染色减弱，反应产物呈淡黄色，尤其是细胞数量减少，差异非常显著(P0.01);治疗组比对照组也有显著差异(P0.05)。结果见表1及图1～3。3.4大肠杯状细胞、5-HT-IR细胞计数的结果各组大鼠大肠杯状细胞计数5-HT-IR细胞计数的比较如表1所示模型组较正常对照组大

7、肠杯状细胞数及5-HT-IR细胞数/10视野减少(随机选择10个20×视野，取其平均值)P0.01，治疗组则较同期模型组增多(P0.01)，差异极显著有统计学意义。表1各组大鼠大肠杯状细胞、5-HT-IR细胞计数/视野(±s)4讨论杯状细胞是肠道的正常细胞，有分泌粘液，润滑和保护肠道粘膜的作用6。5-HT主要来源于胃肠道的肥大细胞、EC细胞、部分胃肠道肌间神经丛神经元及黏膜下神经丛的神经节纤维，其不仅是重要的肠道神经递质，也是重要的免疫调节因子，它可通过多