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时间:2018-10-08
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1、基质细胞衍生因子在哮喘小鼠气道中的表达:黄芸,欧阳海峰,彭晓丹,王文雅,吴昌归【摘要】目的观察基质细胞衍生因子-1(stromal-derivedfactor-1,SDF-1)在鸡卵清蛋白(OVA)诱导小鼠哮喘模型中的表达,探索哮喘气道重塑的发生机制。方法40只雌性SPF级C57BL/6小鼠,体重18~22g,随机分为哮喘组和对照组。按照文献方法建立OVA小鼠哮喘模型。两组动物于末次雾化结束后24h处死,取肺组织行病理切片,苏木精-伊红染色(HE)观察肺脏的组织病理学变化;逆转录聚合酶链式反应(RT-
2、PCR)、免疫印迹法(ethodsFortyfemaleC57BL/6miceofSPFgradelydividedintoasthmagroupandcontrolgroupintoestablishtheasthmaticmodel.Allthemicebeddedsectionsoflungtissuesatoxylinandeosin(HE)foranalyzingpathologicalchanges.SDF-1mRNAextractedfromlungtissueslungtissuesm
3、unohistochemistry(IH).Results①Afterrepeatedallergenchallenge,obviousinfiltrationofinflammatorycellsandproliferationofgobletcellsandsmoothmusclesappearedinmousebronchi.②AccordingtoRT-PCRandountofSDF-1issecretedinthelungtissuesinasthmaticmice,aybeoneofthe
4、criticalfactorsinasthmaticairodeling. KEYal-derivedfactor-1;asthma;airodeling 支气管哮喘是一种慢性气道炎症,伴有气道高反应性和气道重塑,而气道重塑则是一个在慢性炎症基础上的异常损伤修复过程。基质细胞衍生因子-1(stromal-derivedfactor-1,SDF-1)是由基质细胞产生的一种CXC型趋化因子。近年来研究表明,基质细胞衍生因子对组织或器官的创伤、炎症损伤修复起到了重要的作用。但是,SDF-1与哮喘相关性的
5、研究目前还未见报道,我们就此进行了探讨。 1材料与方法 1.1药品与试剂鸡卵清蛋白(OVA)Ⅴ级(美国GBICO公司);氢氧化铝干粉(郑州派尼化学试剂公司);PBS(美国GBICO公司);SDF-1兔抗小鼠一抗(武汉博士德生物有限公司);过氧化物酶标记羊抗兔二抗(美国DAKO公司);ECL发光液(北京碧云天公司);兔抗小鼠内参β-actin(北京博奥森公司);免疫组织化学试剂盒(美国DAKO公司)。 1.2方法 1.2.1哮喘模型的制备小鼠哮喘模型实验参考文献[1],略有变动。实验动物为40只
6、雌性SPF级C57BL/6小鼠(第四军医大学动物中心提供),体重18~22g,随机分为哮喘组和对照组。按照文献方法[1]构建哮喘模型:0、7、14d于小鼠腹腔内注射致敏液0.2mL/只(致敏液为每0.2mLPBS溶液内含10μgOVA、20μg氢氧化铝)。于第21天开始0.5g/L浓度的OVA生理盐水溶液雾化,每次30min,隔日1次,共计18次。对照组用空白PBS及生理盐水,余同模型组。两组动物于雾化结束后24h处死,取右肺于40g/L甲醛溶液中固定,石蜡包埋,用于病理观察及免疫组织化学(IH)检测
7、;取左肺于液氮中保存,用于RT-PCR及in,30个循环。RT-PCR产物以10g/L琼脂糖凝胶电泳,电泳结果在GDS-8000数码成像及分析系统上观察、拍照。 1.2.4免疫组织化学法检测SDF-1的表达哮喘组及对照组肺组织蜡块连续石蜡切片,经脱蜡至水后以0.3mL/L过氧化氢溶液浸泡10min,灭活内源性过氧化物酶;抗原热修复后以正常山羊血清封闭,分别加一抗即兔抗小鼠SDF-1抗体1∶200,4℃过夜;加生物素标记的二抗(羊抗兔IgG1∶200),37℃,40min;加新鲜配制的二氨基联苯胺(D
8、AB)显色,苏木精复染细胞核,显微镜下观察5~10min,棕黄色染色为阳性信号。 1.3统计学分析应用SPSS16.0软件包行统计学分析。实验数据以均数±标准差表示,采用两样本t检验处理统计学数据,P<0.05为差异具有统计学意义。 2结果 2.1小鼠的一般情况及肺组织病理学改变哮喘组小鼠经激发后,出现烦躁不安,呼吸急促,腹部翕动,易激惹;对照组小鼠行动敏捷,一般情况未见异常。哮喘组小鼠肺组织切片HE染色可见,小鼠细支气管周围和血管周围有大量
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