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时间:2018-10-07
《反相高效液相色谱法测定半枝莲中原儿茶酸的含量 》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、反相高效液相色谱法测定半枝莲中原儿茶酸的含量【摘要】目的建立半枝莲药材中原儿茶酸的含量测定方法。方法样品用30%的乙醇回流提取,提取液滤过,以反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定。用DiamonsilTMC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.05%磷酸为流动相,流速为1.0ml·min-1,检测波长为258nm。结果原儿茶酸的保留时间约为7min,且与其它峰的分离度大于1.5。原儿茶酸的线性范围为0.018~0.184μg(r=0.9998),最低检测限为3ng,平均回收率和RSD分别为99.7%和0.27%。结论该方法简便快速,结果准确可靠,可为半枝莲药材的质
2、量评价提供有效手段。【关键词】反相高效液相色谱法半枝莲原儿茶酸含量测定 RP-HPLCDeterminationofProtocatechuicAcidinScutellariabarbara Abstract:ObjectiveToestablishamethodtodeterminethecontentofprotocatechuicacidinScutellariabarbara.MethodsThesampleinationofprotocatechuicacidinScutellariabarbata.ThechromatographicprocedureonsilTMC1
3、8asananalyticcolumnandamixtureof25volumeofmethanol,75volumeof0.05%phosphoricacidasamobilephaseataflol·min-1.Thedetection.ResultsThepeakofprotocatechuicacidappearedforabout7minutes.Resolutionofprotocatechuicacidorethan1.5anditslinearrangeinimumlimitofdetectionethodissensitiveandquickandcanbeusedfo
4、rthequalitycontrolofScutellariabarbara. KeypoonsilTMC18分析柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.05%磷酸;流速:1.0ml·min-1;检测波长:258nm;进样量均为20μl;灵敏度:2.0AUFS。在以上色谱条件下,样品中原儿茶酸与其它组分的色谱峰分离度良好。见图1。 2.2供试品溶液的制备取本品粉末(过60目筛)约2g,精密称定,置50ml圆底烧瓶中,精密加入30%乙醇25ml,称定重量,回流1h。放冷,称定重量,用30%乙醇补充减失的量,摇匀,用0.45μm的微孔滤膜滤过,即得。 2.3对照品贮备液
5、的制备精密称取原儿茶酸对照品适量,加甲醇制成每毫升含0.092mg的溶液,即得。 2.4标准曲线的绘制及线性范围分别精密量取原儿茶酸对照品贮备液0.10,0.20,0.40,0.60,0.80,1.0ml,置10ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,得不同浓度的对照品溶液。分别吸取20μl注入液相色谱仪,测定峰面积。以进样量X(μg)为横坐标,峰面积(×107)Y为纵坐标,绘制标准曲线,经回归处理得回归方程为:Y=4.0946X-0.0014,r=0.9998(n=6)。原儿茶酸在0.018~0.184μg范围内线性关系良好。 2.5稳定性实验分别于0,2,4,6,8,24h精密吸取
6、供试品溶液,进样测定,按上述色谱条件测定峰面积。供试品溶液于24h内,色谱峰面积无明显变化,RSD为0.63%。结果表明在24h内供试品溶液稳定。 2.6精密度实验精密吸取上述供试品溶液,连续进样6次,按上述色谱条件测定峰面积。原儿茶酸峰面积的RSD为0.41%,表明该法的精密度良好。 2.7重复性实验取同一批半枝莲药材粉末(过60目筛)约2g,共6份,精密称定,按“2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件测定,计算含量,其RSD为0.86%,表明该法重现性良好。 2.8最低检测限实验取上述对照品贮备液,逐步稀释,进样,直至信噪比S/N≥3,此时进样量即为最低检测限。原儿茶酸
7、的最低检测限为3ng。 2.9回收率实验取已知原儿茶酸含量为59.61μg·g-1的半枝莲药材粉末(过60目筛)约1g,共6份,精密称定。分别精密量取上述原儿茶酸对照品储备液0.7ml,加入上述6份药材中,按“2.2”项下方法操作制备供试品溶液。测定其平均回收率为99.7%,RSD为0.27%。可见本方法的准确度高,精密度好,方法可行。 2.10样品测定取24批半枝莲药材粉末(过60目筛)约2g,精密称定,按“2.2”项下制备供
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