医学免疫学 免疫学检测技术ppt课件

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1、免疫学检测技术Immunodiagnosis第一节抗原或抗体检测I.Detectionofantigensorantibodies一、抗原-抗体反应的特点Specificity（一）高度特异性Cross-reaction:commonantigen交叉反应：共同抗原Antiserumabsorption抗血清吸收1stantibody&2ndantibody一抗；二抗Reversibility/invertibility:（二）可逆性non-covalent,surface-binding,di

2、ssociable非共价、表面结合，可解离complementarycapacity:affinity;avidity互补程度：亲和力；亲合力Visibility（三）可见性的条件Compatibleconcentrationsofantigenandantibodycombinedinproportionatornearequivalence[Antigen:multivalent;Antibody(IgG):divalent]比例适合：抗原多价，抗体2价。交织成网。Phvalue;Tempe

3、rature;Ionicconcentration条件适宜：酸碱度、温度、离子浓度Adequateconcentration,bindingstrength;reactiontime足够浓度、结合强度和反应时间Prozonephenomenon前带现象I)Agglutination（一）凝集反应：颗粒性抗原或包被有可溶性抗原的颗粒+相应抗体肉眼可见的凝集块1.直接凝集颗粒性抗原+相应抗体玻片凝集：抗原定性（ABO血型）试管凝集：抗体定量（肥达反应）2.间接凝集包被有可溶性抗原的颗粒+相应抗体红

4、细胞（间接血凝）；乳胶（间接乳凝）Coombs’Test:红细胞（Rh抗原）+不完全抗体+抗人球蛋白3.派生的试验反向间接凝集反应：包被抗体的颗粒+抗原间接凝集抑制反应：（乳胶妊娠试验）抗体+未知抗原+包被有相应可溶性抗原的颗粒凝集？HaemagglutinationII)Precipitation（二）沉淀反应可溶性抗原+相应抗体肉眼可见的沉淀物使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散1.单向免疫扩散：抗原的定量（Ig、C3）2.双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析3

5、.免疫电泳：电泳+双向免疫扩散（抗原分析）4.对流电泳：双向免疫扩散+电泳（抗原/抗体定性）5.火箭电泳：单向免疫扩散+电泳（抗原定量）免疫比浊：抗体+递增量抗原比浊（抗原定量）III)ImmunolabellingTechniques（三）免疫标记技术标记物：荧光素、酶、放射性核素、电子致密物质、化学发光物质标记对象：抗原或抗体用途：定性、定量、定位免疫荧光法（IFA）荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位（1）直接荧光法（2）间接荧光法：荧光素一抗荧光素二抗对每种抗体作标记不必标记

6、每种抗体特异敏感测Ag测Ag/Ab免疫荧光法2.酶免疫测定（EIA）:ELISA与酶免疫组化（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原（2）间接法ELISA：查抗体（3）BAS-ELISA：Biotin-Avidin-酶放大系统（4）ELISPOT测定法：__包被物待测物测定结果___抗CK抗体CK分泌细胞单一CK已知抗原B细胞特异B细胞（5）酶免疫组化*酶标抗体+组织/细胞（未知抗原）+形态学检查*免疫组化技术：可对抗原定性、定量、定位酶免疫组化：HRP免疫金银组化：胶体金颗粒免疫电镜技术：HRP、

7、胶体金、铁蛋白双抗体夹心法、间接法ELISA间接法ELISAELISA操作图可调移液器8孔道可调移液器3.放射免疫测定（RIA）常用125I，测定微量物质4.化学发光免疫分析常用鲁米诺，测定超微量物质5.免疫印迹法（WesternBlotting）先做凝胶电泳将蛋白质分区再将蛋白质转移至固相载体后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定第二节免疫细胞的测定一、淋巴细胞的分离与类型鉴定（一）血细胞分离外周血密度梯度离心法外周血单个核细胞（淋巴细胞+单核细胞）吸附培养分离法淋巴细胞尼龙毛，抗CD3单抗，E花

8、结T细胞B细胞（二）淋巴细胞鉴定免疫荧光法常用间接法测CD3/CD4/CD8、mIgM/mIgD2.磁珠分离法如抗CD4抗体交联微珠可分离CD4与CD83.流式细胞术（FlowCytometry,FCM）可分析细胞大小、核型、表面分子（多种荧光标记）检测各类免疫细胞及其比率白血病、淋巴瘤的免疫学分型细胞分选二、淋巴细胞功能测定（一）T细胞功能测定1.T细胞增殖试验：丝裂原/抗CD3刺激/特异抗原细胞增殖（1）同位素掺入法（2）MTT法（3）形态观测法2.细胞毒试验CTL、NK细胞杀伤靶细胞（1