免疫组化技术20131讲解课件

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1、免疫组织化学染色技术李会强医学检验学院Email:lihuiqiang1965@163.com组织化学染色技术HistochemistryTechnique观察对象组织、细胞使用工具普通显微镜荧光显微镜形态与结构苏木素曙红免疫组织化学染色技术ImmunohistochemistryTechnique指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原（目的蛋白）进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。ImmunohistochemistryTechnique特定蛋白（抗原）（透膜）授课提纲基质标本的制作荧光免疫组化技术酶免疫组化技术相关问题与解决方案授课

2、提纲基质标本的制作荧光免疫组化技术酶免疫组化技术相关问题与解决方案标本类型组织标本冰冻切片石蜡切片细胞标本体外培养细胞（单层细胞、悬浮细胞）体液细胞（涂片）固定与保存固定的目的防止细胞自溶，保持细胞形态与机构；保存组织细胞抗原性；防止标本脱落；防止滋生微生物，预防组织腐败标本固定以不损伤细胞形态、不损伤抗原特异性为基本原则固定与保存固定剂蛋白类乙醇或甲醇微生物类丙酮、三氯化碳多糖类10%福尔马林抗原修复目的：充分暴露抗原表位，利于抗体识别。方法：酶（无花果蛋白酶，胰蛋白酶）消化法；盐酸水解微波处理煮沸法授课提纲基质标本的制作荧光免疫组化技术酶免疫组化技术相关问题与解决方案标记物荧光素异硫

3、氰酸荧光素（FITC）四乙基罗丹明（RB200）藻红蛋白（PE）藻红蛋白花青苷（PE-Cy5）技术类型直接染色法荧光素直接标记在特异性抗体（Ab1)间接染色法荧光素标记第二抗体（Ab2)第二抗体针对第一抗体种属特异性的表位（如羊抗鼠Ig或羊抗人Ig）直接法实例：细胞鉴定免疫细胞及其亚群（流式细胞术）T细胞CD3+CD4+CD8+B细胞NK细胞免疫细胞分类与计数18SuppressorTcellR1Tcell/BcellHelperTcell间接法实例：检测抗核抗体检测原理已知抗原肝细胞/HEp-2待检抗体第二抗体荧光标记兔抗人Ig实例：检测病原体（病毒、细菌）检测原理待检病毒（抗原）已知

4、抗体单抗或多抗第二抗体荧光标记羊抗鼠（或兔）Ig荧光显微镜（落射式）关键汞灯光源激发滤片暗场聚光镜吸收滤片荧光显微镜（落射式）荧光显微镜（落射式）授课提纲基质标本的制作荧光免疫组化技术酶免疫组化技术相关问题与解决方案主要类型酶标记抗体同荧光免疫组化非酶标记抗体酶-抗酶系统生物素-链霉亲和素系统技术特点以酶作为抗原，制备抗酶抗体；酶（抗原）与抗酶（抗体）结合制备酶-抗酶复合物；通过桥联抗体与识别系统（待检抗原-特异性抗体）连接；酶桥法常用酶和相应底物过氧化物酶Peroxidase（P）二氨基联苯胺（DAB）碱性磷酸酶（AP）alkalinephosphatase（AP）溴氯羟吲哚磷酸盐（B

5、CIP）过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法PAPPAP复合物抗体选择第一抗体识别抗原第二抗体（桥联抗体）能同时与第一、第三抗体结合第三抗体抗酶抗体与第一抗体同源PPPAAAκλ图双酶双底物(复合物法)双重酶标染色原理兔PAPGARIgG兔抗κAg鼠APAAPGAM.IgG鼠抗λ实例：淋巴瘤轻链双重染色法一抗兔抗κ鼠抗λ二抗羊抗兔羊抗鼠显色系统PAPAPAAP亲和素-生物素-过氧化物酶复合体（ABC）生物素（Biotin）亲和素（Avidin）生物素标记抗体（B-Ab）生物素标记过氧化物酶（B-P）亲和素-生物素-过氧化物酶复合体（ABC）EnVision授课提纲基质标本的制作荧光免疫组

6、化技术酶免疫组化技术相关问题与解决方案识别抗体（第一）选择单克隆抗体（McAb）特异性强敏感性差多克隆抗体（McAb）特异性差敏感性强识别（第一）抗体选择构象糖基化碳水化合物第二抗体选择选择显色系统荧光免疫组化酶免疫组化PAPAPAAPABCLAB？封闭非特异性结合特异性显色具备特定部位显色特定组织、特定细胞、特定结构不均一显色非特异性显色主要原因内源性酶内源性生物素抗体特异性不强漂洗不充分基质制作非特异性背景显色预先处理加底物消耗正常血清封闭TheEnd