牡蛎多糖抑制流感病毒增殖的实验研究

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1、牡蛎多糖抑制流感病毒增殖的实验研究【摘要】　　目的研究牡蛎多糖对流感病毒在MDCK细胞中增殖的抑制作用。方法采用血凝滴度测定牡蛎多糖对MDCK细胞培养甲型流感病毒增殖的抑制作用；通过联合用药试验研究牡蛎多糖对利巴韦林抗流感病毒的协同效应。结果牡蛎多糖能显著降低MDCK细胞培养流感病毒的血凝滴度；牡蛎多糖与利巴韦林联合使用时，能显著抑制MDCK细胞培养流感病毒的增殖并具有相加效应。结论牡蛎多糖能明显抑制MDCK细胞培养流感病毒的增殖，对利巴韦林抗流感病毒具有相加效应，具有开发成抗流感病毒生物制剂的前景。【关键词】牡蛎

2、多糖流感病毒Abstract：ObjectiveTostudytheinhibitoryeffectsofOysterpolysaccharides(OPS)oninfluenzavirusreproductioninMadin-Darbycaninekidney(MDCK)cellcultures.MethodsTheMDCKcellculturewasusedtoobservetheinhibitionofOPSontypeAinfluenzavirusbyhemagglutinationtestinterms

3、ofhemagglutinationtiter.ThesynergisticeffectofOPSandribavirinwerestudiedbyassociatingmedicationcoulddecreasethehemagglutinationtiterofinfluenzavirusinMDCKcellculture.OPSandribavirindrugcombinationcouldinhibittheproliferationofinfluenzavirusinMDCKcellcultureand

4、hadtheadditioncansignificantlyinhibittheproliferationofinfluenzavirusinMDCKcellcultures.OPShastheadditioneffectofribavirinonactivityofanti-influenzavirus.OPShasthepotentialtobedevelopedastheanti-influenzavirusbiologicalagent.Keywords：Oyster;Polysaccharides;Inf

5、luenzavirus　　《神农本草经》载牡蛎具有敛阴、潜阳、化痰、软坚等功用。主治惊厥、眩晕、盗汗、崩漏、带下。中华人民共和国卫生部批准其为第一批既是药材又是食品的保健品。根据分析,其肉含有大量的糖原和多糖。研究表明，牡蛎提取物有增强免疫、抗疲劳、抗肿瘤、保护肝脏和心血管、抗菌等作用［1］，本实验对牡蛎多糖抑制流感病毒在狗肾细胞中增殖的作用进行了研究，为进一步研究牡蛎的药用价值，深入开发海洋药用资源提供参考。1材料牡蛎多糖(Oysterpolysaccharides,OPS)由广东医学院生物化学与分子生物学研究所

6、提供，为多糖含量%的灰白色粉状制品；甲型流感病毒干粉购自国家流感中心；狗肾传代细胞由湛江市疾病预防控制中心提供；健康9日龄受精鸡胚由湛江海洋大学鸡场提供；利巴韦林注射液由天津药业集团新郑股份有限公司生产；MEM培养基购自Gibco公司；小牛血清购自杭州四季青生物工程公司；胰酶、EDTA、MTT均购自Amresco公司；DMSO购自Sigma公司。细胞培养液：含有谷氨酰胺的MEM培养基，加入1×105U/L青霉素，100mg/L链霉素，10%小牛血清，使用前用NaHCO3调pH至；细胞维持液：基本同培养液，但不含小牛

7、血清，而含终浓度为/L胰酶，使用前用NaHCO3调pH至。方法.1流感病毒扩增取9日龄鸡胚10个，5个注射病毒液，5个注射等体积生理盐水作为空白对照。将一瓶甲型流感病毒干粉溶于ml灭菌生理盐水得病毒液，用注射器注射病毒液入尿囊腔，然后用石蜡溶化封口，置34℃温箱培养。每日照检鸡胚一次，并180°转动鸡胚两次，弃去于2h内死亡者。培养7h后收获病毒液，并测定血凝滴度，若滴度较低则以收获的病毒液继续扩增至滴度256以上。依据实验需要，-25℃下短期保存或将病毒液冻成干粉后4℃长期保存。.MDCK细胞培养按参考文献［2］

8、方法，MDCK细胞在MEM基质中，37℃，5%CO2温箱内培养传代。.甲型流感病毒在MDCK上的传代按参考文献［3］方法，加以改动。MDCK细胞1×108/L，按ml/孔加入96孔培养板中，置于37℃、5%CO2温箱内培养，细胞长成单层后，倾去孔中培养液。流感病毒用细胞维持液做系列10倍稀释，按ml/孔分别加入细胞已长成单层的96孔培养板中，每个剂量组设4个