医药学临床医学毕业论文 急性白血病mts1-p16基因缺失的研究

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1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号：XXXXXXXXX姓名：XXX专业：医药学临床医学论文题目：急性白血病MTS1/P16基因缺失的研究指导老师：XXX二〇一一年十二月十日作者:黄毓　甘宝文　周建生　薜小霞　周吉成关键词：急性白血病MTS1/P16基因　　急性白血病是我国常见的造血系统恶性疾病。其病因及发病机理目前还不完全清楚，病毒、遗传因素及染色体异常与它的发生都有关系。现已证实，MTS1/P16基因在人类多种恶性肿瘤中存在着不同形式的改变［1,2］，但有关MTS1/P16基因在急性白血病中的研究国

2、内报道少［3］。我们采用差别PCR技术对MTS1/P16基因在急性白血病中纯合缺失进行检测，以了解MTS1/P16基因缺失与急性白血病的关系。　　1　材料与方法　　1.1　标本来源　30例急性淋巴细胞白血病(ALL)，男19例，女11例，年龄2～70岁，中位年龄19岁。43例急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)，男24例，女19例，年龄2.5～73岁，中位年龄34岁。对照组15例，为非恶性血液病病人(缺铁性贫血7例，血小板减少性紫癜8例)，均为我院住院病人，诊断标准均符合FAB法，治疗前抽骨髓1～2

3、ml，以用于DNA提取。　　1.2　DNA提取　参照《分子克隆实验指南》［4］提取高分子量DNA，用TE(pH8.0)溶解，紫外分光光度测其OD值，调整浓度至50ng/ml，以备PCR扩增。　　1.3　引物设计　根据已知MTS1/P16基因序列，在第2外显子的两侧设计1对扩增引物，PCR扩增物为480bp，引物序列如下：PS1:5′-GGAAATTGGAAACTGGAAGC-3′;PS2:5′-TCTGACCTTTGGAAGCTCT-3′。选用DMDExon51引物做内对照，其PCR扩增产物为38

4、8bp，引物序列如下：PS1:5′-GAAATTGGCTCTTTAGCTTGTGTTTC-3′；PS2:5′-GGAGAGTAAAGTGATTGGTGGAAAATC-3′。上述引物均由中国科学院上海生化所合成。　　1.4　PCR扩增　PCR反应混合液含10×PCRBuffer,200μmol/LdNTP，1μmol/Lprimer,200ng模板DNA，TaqDNA2.5U加H2O至终体积50μl，在DNA扩增仪上进行如下循环：95℃预变性5.0min，95℃，1.0min；58℃，1.0min；

5、72℃，1.5min；30个循环。取5　μl　PCR产物在2%琼脂糖凝胶(加EB　0.5　μg/ml)上电泳分析(TaqDNA聚合酶为美国LifeTechnologies产品)。　　2　结果　　30例ALL有10例MTS1/P16Exon2纯合缺失，频率为33.3%(10/30)；43例ANLL中有6例MTS1/P16Exon2纯合缺失，频率为14.0%(6/43)，15例对照无MTS1/P16Exon2纯合缺失。　　3　讨论　　MTS1/P16是定位于人类染色体9P21的多肿瘤抑制基因［2,3］

6、，编码一分子量为16kD的核磷酸蛋白，P16蛋白可直接作用于细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)4/6，周期素(cyclin)D和RB基因编码蛋白PRb的反馈通路，通过调节PRb活性，抑制细胞从G1→S期转变，防止细胞增殖［5,6］。MTS1/P16基因在人类多种原发性肿瘤和细胞系中主要表现为纯合缺失或突变失活。等位基因纯合缺失在白血病细胞系中达25%～65%［1,7］。本实验发现，30例ALLMTS1/P16纯合缺失率为33.3%(10/30)，43例ANLLMTS1/P16纯合缺失率为14.0%(6

7、/43)。文献报道造血系统恶性肿瘤中MTS1/P16基因缺失和突变的检出率为5.56%～43.60%，平均13.81%，其中以急性淋巴细胞白血病(ALL)检出率最高，平均为29.80%，而在急性非淋巴细胞白血病(ANLL)，慢性粒细胞白血病(CML)和淋巴瘤患者检出率极低［8］。Hebert报道55例ALL中22例有MTS1/P16基因缺失，占44%［9］。Ogawa报道1组134例AML，仅有2例有MTS1/P16基因缺失［10］。　　MTS1/P16基因在不同组织的肿瘤标本或来源于不同地区同一

8、种组织的肿瘤标本中，其缺失和突变频率也不同［11］，这一现象提示MTS1/P16基因改变在不同组织的癌变过程中的作用有所不同。造成这种差异的原因尚不清楚，但可能与各脏器组织接受致癌物的种类，剂量以及对致癌物的代谢能力有关。本文研究结果，MTS1/P16基因在ALL中的高频率缺失及在ANLL中的改变，提示MTS1/P16基因缺失与急性白血病的发生可能有关。　　参考文献：　　［1］NoboriT,MiuraK,WuDJetal.Deletionsofthecyclindependent