何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响.doc

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何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响作者：熊平源胡艺兰郭凯文　唐朝晖白惠卿【摘要】　　为了解何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响，采用微量浊度法测定小鼠腹腔巨噬细胞介导的细胞毒活性；采用小鼠胸腺细胞检测法测定小鼠腹腔巨噬细胞白细胞介素1的分泌活性；采用姬姆萨染色法检测小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。结果表明，各药物实验组小鼠腹腔巨噬细胞介导的细胞毒作用及泌白细胞介素1的分泌活性明显增强(P<0.01)；各药物实验组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能明显增强(P<0.01)，提示何首乌能促进小鼠腹腔巨噬细胞功能。【关键词】何首乌；吞噬细胞；细胞毒；白细胞介素1　　TheEffectofthePolygonumMultiflorumThunbontheMouse’sPeritonealMacrophage　　AbstractToknowtheeffectofthePolygonumMultiflorumThunbonthemouse’speritonealmacrophage.Usethemicrnephelometrymethodtodetectthecytotoxicactivitythatthemouse’speritonealmacrophagemediated;usethemouse’sthymocytedetectionmethodtodeterminetheinterleukin1’s(IL1)secretoryactivityofthemouse’speritonealmacrophage;UsetheGiemsastainingmethodtodetectthemouse’speritonealmacrophage’sphagocytosisfunction.Everymedicalexperimentalgroupshowobviouslybettersecretoryactivityoftheinterleukin1ofthemouse’speritonealmacrophageandthebettercytotoxicactivitythatthemouse’speritonealmacrophagemediated（P<0.01）;Everymedicalexperimentalgroupshowobviouslybetterphagocytosisfunctionofthemouseperitonealmacrophage（P<0.01）.PolygonumMultiflorumcanenhancethefunctionofthemouse’speritonealmacrophage.　　Keywordspolygonummultiflorumthunb;macrophage;cytotoxic;interleukin1(IL1)　　何首乌（PolygonumMultiflorumThunb）为蓼科植物何首乌干燥块根，主要含有大黄酚和大黄素，其次为大黄酸、大黄素甲醚和大黄蒽酮、淀粉、粗脂肪、卵磷脂等。据本草纲目记载，何首乌主治祛风利湿、和血调经。现代医学认为，何首乌具有延缓衰老、降低血脂、保护肝脏及抗菌消炎等作用。本研究就何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响进行了探讨。　　1材料3 何首乌在中药店购买，3HTdR为中国科学院原子能研究院产品，小鼠S180肉瘤细胞由北京大学医学部免疫学系提供。动物Ba1b/c品系小鼠，8～12周龄，体重18～22g，雌雄各半，由北京大学医学实验动物中心提供。CO2培养箱为美国NaPCo产品，倒置生物显微镜为重庆光学仪器厂产品。　　2方法与结果将小鼠随机分成4组，每组15只。正常对照组每只每日用0.25mL无菌生理盐水连续腹腔注射7d。何首乌水提物用生理盐水配成4mg/ml（相当于生药120mg）。药物I组给予何首乌水提物2mg/（鼠.d），连续腹腔注射7d。药物II组给予何首乌水提物4mg/（鼠.d），连续腹腔注射7d。药物III组给予何首乌水提物6mg/（鼠.d），连续腹腔注射7d［1］。　　2.1何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞介导的细胞毒活性的影响用3HTdR标记小鼠S180肉瘤细胞（靶细胞）。将制备好的腹腔Mφ悬液加入96孔培养板中，100uL/孔（浓度为1×106mL-1）培养4h，洗去悬浮细胞，加入10uLLPS继续培养8h，加入3HTdR标记的小鼠S180肉瘤细胞100uL（效靶比为5：1），同时设靶细胞对照孔，培养20h，吸取上清100uL，检测放射活性，计算细胞杀伤率［2］。　　2.2何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞分泌白细胞介素1β的影响　　白细胞介素1β的测定：采取小鼠胸腺细胞检测法［3］。一式三份，包括阴性对照，β闪烁液计数仪测定3HTdR掺入值。表1何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞毒活性的影响（略）注：*与对照组比较，P<0.01。表2何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞分泌白细胞介素1β的影响（略）注：*与对照组比较，P<0.01；**与对照组比较，P<0.001。　　2.3何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响实验前3天，腹腔注射无钙镁Hank′s液2mL作为巨噬细胞诱导剂。测时脱颈椎处死小鼠，用pH6.5～pH6.7的无钙镁Hank′s液2mL洗出全部腹腔巨噬细胞，取1mL腹腔洗液置于5mL离心管中，加入10%鸡红细胞0.2mL，插入5×20mm2盖玻片条，经37℃30min后取出玻片条，洗涤，固定，姬姆萨染色，油镜下计数巨噬细胞吞噬百分率，并计算其吞噬指数［4］。图2结果显示，与对照组比较各药物实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数明显增强，其中药物I组、药物II组与对照组比较，P＜0.05；药物III组与对照组比较，P＜0.01。　　3讨论3 巨噬细胞是机体固有免疫的重要组成细胞，是执行固有免疫的效应细胞，同时在特异性免疫应答的各个阶段也起重要作用。其主要功能是通过吞噬作用清除体内衰老损伤或凋亡的细胞，以及免疫复合物和病原体等抗原性异物。当巨噬细胞被细菌脂多糖或IFNγ和GMCSF等细胞因子激活后，可将胞内活性氧、活性氮和酶类物质释放至胞外，通过细胞毒效应使肿瘤等靶细胞发生损伤和破坏，产生抗肿瘤、抗病毒作用；活化巨噬细胞还可通过分泌大量TNFα，诱导肿瘤和病毒感染等靶细胞发生凋亡；在抗肿瘤和抗病毒等特异性抗体参与下，也可通过ADCC效应杀伤肿瘤和病毒感染细胞等。此外，活化巨噬细胞也可以通过分泌多种细胞因子如IL1β、TNFα、IL6等参与免疫调节。有报道称何首乌能促进小鼠脾细胞抗体的分泌和细胞毒T细胞对靶细胞的杀伤功能［5］。不仅如此，本研究结果还表明，何首乌也能增强小鼠腹腔巨噬细胞介导的细胞毒活性、IL1β的分泌活性及吞噬功能,提示何首乌不仅能增强机体的特异性免疫，还能促进机体的固有免疫。【参考文献】　　1秦凤华，谢蜀生，张文仁，等.白花蛇舌草对小鼠免疫功能的增强作用.上海免疫学杂志，1990,10（6）:321～323.　　2张桂梅，冯作化，郝天玲，等.大蒜素对巨噬细胞介导的细胞毒作用的影响.中国中药杂志,1996,21（1）：45～47.　　3杨贵珍.免疫生物工程纲要与技术.吉林科学技术出版社,1991,16～18.　　4熊平源，边藏丽.医学免疫学与微生物学实验教程.广西师范大学出版社,1997,5～8.　　5秦凤华，谢蜀生，张文仁，等.何首乌对小鼠免疫功能的影响.免疫学杂志，1990，6（4）：252～254.3