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时间:2017-11-13
《公共管理图书馆管理毕业论文 优化图书馆室内空间布局》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号:XXXXXXXXX姓名:XXX专业:公共管理图书馆管理论文题目:优化图书馆室内空间布局指导老师:XXX二〇一一年十二月十日[摘要]目的:在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达乙型肝炎病毒(HBV)抗原表位,并对其诊断敏感性进行评价。方法:人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHVRNA2I3位点,构建重组质粒,在原核pET系统(BL21细胞)中表达。通过ELISA和Westernblot检测表达产物的抗原性,并以表达产物
2、为包被抗原,通过ELISA和Westernblot检测58份乙肝患者血清抗HBs。结果:嵌和蛋白可与抗HBs特异性结合,其ELISA检测抗HBs阳性率为77.5%,Westernblot的为68%,而对照试剂盒的为62%。结论:在外源抗原表位表达系统中表达的HBV重组抗原表位具有良好的抗原性,有诊断应用价值。 [关键词]HBV;抗原表位;抗原性;FHVRNA2载体系统 StudyonAntigenicityofHBVRecombinantEpitope Abstract:ObjectiveConstructionandEx
3、pressionHBVrecombinantepitopeinaforeignepitopepresentingvector,andevalutionofdignosticsensitivityforantiHBswithHBVepitope.MethodsOligonucleotidsencodedtwentyfouraminoacids(aaS124147)whichiswithin“a”antigenicdeterninantweresynthesizedandinsertedintoaforeignepitopepres
4、entingcarrierI3site(FHVRNA2cDNAI3).HBVepitopewasexpressedinaprokaryoticcellularsystem(BL21cell).TheexpressionproductwasanalyzedanditsantigenicitywasfurtherstudiedbyELISAandWsternblotmethodwithchimericproteinascoatingantigen.weusedchimericproteinascoatingantigentotesta
5、ntiHBswithELISAandWsternblotin58seralsamples.ResultsThechimericproteinreactedwithantiHBsseralspecially.ThedetectionpositiveratioofantiHBsis77.5%and68%respectivelybyELISAandWsternblotwithchimericproteinascoatingantigen,thecontrol’swas62%.ConclusionHBVepitopeexpressedin
6、aforeignepitopepresentingcarrierpossessedgoodantigenicityanddiagnosticvalue. Keywords:HBV;Epitope;Antigenicity;FHVRNA2carriersystem 乙型肝炎病毒(HBV)是乙型肝炎的病原体,并引起慢性肝炎和肝硬化,而且与肝癌的发生密切相关。迄今,对HBV感染最有力的预防和控制措施,仍是发展疫苗。FHVRNA2载体系统[1]是一个以昆虫小RNA病毒flockhousevirus外壳蛋白为载体的新型抗原表位表达载体,
7、此系统中表达的载体蛋白可自动组装成病毒样颗粒,使插入的外源抗原表位可以暴露在颗粒的表面,保持天然构象和免疫学特性。本研究拟将HBVa抗原表位插入到FHV外壳蛋白上,并对其抗原性及诊断意义进行了研究。 1材料与方法 1.1细胞重组质粒DNA大肠杆菌DH5α用于重组质粒pETEDNA的克隆和扩增。大肠杆菌BL21(DE3)用于重组质粒pETEDNA的表达。质粒DNA在含200μg/ml氨苄青霉素的LB或TB培育中生长,FHVRNA2载体系统即重组pETFHV构建见[1]。 1.2HBV抗原表位及重组pETE的构建和表达 1
8、.2.1HBV抗原表位及重组pETE的构建人工合成HBV特异抗原表位E(氨基酸序列:124CTTPAQGNSMFPSCCCTKPTDGNC147)寡核苷酸序列:正向5’GATGCACGACTCCTGCTC
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