Aurora与VEGFR2双靶点抑制剂TY-011抗胃癌作用及其机制研究

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1、2018届研究生博士学位论文分类号：学校代码：10269密级：学号：52143300013EastChinaNormalUniversity博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：Aurora与VEGFR2双靶点抑制剂TY-011抗胃癌作用及其机制研究院系：化学与分子工程学院专业：生物化学与分子生物学研究方向：分子肿瘤药理学指导教师：章雄文教授学位申请人：刘旺2018年5月IDissertationforDoctoraldegreein2018UniversityCode：10269StudentID：52143300013EastChinaNorma

2、lUniversityTitle：AntitumoractivityandmechanismofTY-011againstgastriccancerbyinhibitingAuroraandVEGFR2kinasesDepartment:CollegeofChemistryandMolecularEngineeringMajor:BiochemistryandMoleculeBiologyResearchdirection:MolecularCancerPharmacologySupervisor:ProfessorXiongwenZhangGraduate:WangLiu

3、May2018II华东师范大学博士研究生学位论文III华东师范大学博士研究生学位论文博士学位论文答辩委员会成员名单姓名职称单位备注南发俊研究员上海药物研究所主席谢欣研究员上海药物研究所黄敏研究员上海药物研究所吕伟研究员华东师范大学余家会教授华东师范大学IV华东师范大学博士研究生学位论文Aurora与VEGFR2双靶点抑制剂TY-011抗胃癌作用及其作用机制研究中文摘要背景：在中国，胃癌发病率在全部恶性肿瘤中居第二，胃癌发病人数已超过世界胃癌总数的三分之一，严重危害中国人民的生命健康。Aurora激酶和VEGFR2在胃癌组织中均存在高表达的现象。鉴于Aurora激酶抑制剂和V

4、EGFR2抑制剂单独使用的效果都不佳，寻找能够同时抑制Aurora激酶和VEGFR2的双靶点药物具有重大意义。我们实验室和药化课题组合作，针对Aurora激酶和VEGFR2为靶点，设计并合成一系列化合物，并从中筛选出了能够靶向抑制AuroraA/B激酶和VEGFR2的抑制剂TY-011，并在细胞水平和动物水平都具有良好的抗肿瘤活性。方法：1.采用HTRF®KinEASE™-STK（均相时间分辨荧光）体外酶学活性检测法筛选对AuroraA/B具有体外酶学抑制活性的化合物，从中选出抑制效果最好的化合物TY-011，并进一步检测TY-011对VEGFR2的体外酶学抑制效果。2.采

5、用MTT法检测TY-011给药以后对人肝癌、胃癌和结肠癌细胞株增殖活性的影响。3.采用裸鼠人胃癌细胞异种移植瘤动物模型评价TY-011在动物体内的抗胃癌活性。4.计算机模拟药物和激酶分子结构对接，从分子层面验证TY-011是否能够与AuroraA和AuroraB在结构上形成配对。5.采用免疫荧光染色和蛋白印记法（WB）检测细胞给药前后蛋白磷酸化及含量的变化情况。V华东师范大学博士研究生学位论文6.采用流式细胞技术检测给药后细胞是否产生周期阻滞和凋亡。7.采用TUNEL荧光染色技术检测胃癌肿瘤组织的凋亡程度。8.采用HUVEC管腔形成实验检测TY-011是否具有抗血管生成作用

6、。9.采用免疫组化染色检测TY-011对肿瘤组织血管生成作用的影响。10.采用蛋白组学方法检测分析TY-011对胃癌细胞给药后蛋白表达量的变化。结果：1.HTRF®KinEASE™-STK体外酶学检测实验表明：TY-011是一种潜在的AuroraA/B激酶和VEGFR2的抑制剂，呈浓度依赖性地抑制AuroraA/B激酶和VEGFR2的体外酶学活性，对AuroraA、AuroraB和VEGFR2体外抑制作用的IC50值分别是102.1±10.1nM、93.9±33.7nM和103.4±6.2nM。2.体外细胞生长抑制实验表明TY-011能够有效抑制人胃癌细胞的生长，对胃癌细胞

7、增殖抑制作用的IC50值均在1μM左右，并对部分肝癌细胞也具有一定的抑制作用。3.裸鼠人胃癌细胞异种移植瘤模型实验显示：口服TY-011能够明显的抑制异位接种后胃癌细胞的生长，在剂量为9mg/kg的给药浓度下，肿瘤抑制率高达90%，肿瘤退化率高达100%。给药治疗期间，小鼠体重没有明显下降。4.计算机分子结构对接模拟实验表明，化合物TY-011能够与AuroraA和AuroraB激酶上的ATP连接位点相结合，竞争性抑制ATP与激酶的结合，进而抑制AuroraA/B酶学活性。5.WB结果显示，AuroraA与Auro