日本沼虾血蓝蛋白基因cdna全长克隆及表达分析

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1、日本沼虾血蓝蛋白基因cDNA全长克隆及表达分析日本沼虾血蓝蛋白基因cDNA全长克隆及表达分析王文锋12夏西超1王雪参1吕黎1杨洪1宁黔冀1510151河南师范大学生命科学学院河南新乡4530072新乡医学院生命科学技术系河南新乡453003摘要目的克隆日本沼虾血蓝蛋白基因进行生物信息学及时空表达分析方法利用RACE技术从肝胰腺中克隆血蓝蛋白基因cDNA全长序列用生物软件对其序列进行生物信息学分析时空表达分析采用Real-timePCR方法结果日本沼虾血蓝蛋白基因cDNA全长2151bp包含145bp的5′UTR14bp的3′

2、UTR和1991bp的开放阅读框ORFORF编码663个氨基酸预测分子量为7665KDa理论等电点为542含有典型的三个血蓝蛋白结构域和两个保守的铜离子结合位点与淡水螯虾凡纳滨对虾血蓝蛋白相似性分别为70和63该基因在肝胰腺中的相对表达量最高肌肉和血细胞表达较弱大颚器官表皮和卵巢几乎不表达肝胰腺血蓝蛋白基因的表达量在蜕皮间期最高蜕皮后期和蜕皮前期较低嗜水气单胞菌刺激后肝胰腺中的表达量显著增加结论与其它甲壳动物相似日本沼虾血蓝蛋白基因具有典型的结构域和保守的铜离子结合位点在蜕皮间期的肝胰腺中呈高表达是参与机体免疫防御反应的一种重

3、要分子关键词日本沼虾血蓝蛋白基因克隆RACE实时荧光定量PCR时空表达中图分类号Q45920MolecularcloningandexpressionanalysisofhemocyaningenefromMacrobrachiumnipponenseWangWenfeng12XiaXichao1WangXueshen1LvLi1YangHong1NingQianji11CollegeofLifeSciencesHenanNormalUniversityHeNanXinXiang45300725303540452Xinxia

4、ngmedicaluniversityHeNanXinXiang453003AbstractObjectiveTheaimofthisstudywastoclonethehemocyaningenefromMacrobrachiumnipponenseandtodothebioinformaticsandspatialandtemporalexpressionanalysisofthegeneMethodsThehemocyaningenewasclonedfromhepatopancreasofMacrobrachiumni

5、pponenseusingtherapidamplificationofcDNAendsRACEmethodanditssequencewasanalyzedwithbiologicalsoftwarespatialandtemporalexpressionsofthegeneweredetectedbyreal-timePCRResultsThefull-lengthcDNAofhemocyaninwas2151bpandcontaineda145bpof5-untranslatedregionUTRa14bpof3UTRa

6、nda1991bpofopenreadingframeORFthatencodedaproteinof663aminoacidswithacalculatedmolecularmassof7665kDaandpIat542Thededucedaminoacidsequencecontainingthreehemocyanindomainsandtwocopper-bindingsitesexhibited70similaritytothatofPacifastacusleniusculus63tothatofLitopenae

7、usvannameiThetwocopper-bindingsitesandsixhistidineresiduesnecessaryforthestabilizationoftheoxygenbindingwerehighlyconservedThe3-DstructuremodelingofhemocyaninwasverysimilartothatofHC1fromPanulirusinterruptusReal-timePCRresultshowedthatthegenewasexpressedhighlyintheh

8、epatopancreasweaklyinthemusclesandbloodcellsandhardlyinthemandibularorganskinandovarianItstranscriptderivedfromhepatopancreaswashighestins