葡萄球菌和链球菌的微生物学检查

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1、青岛农业大学兽医微生物实验报告题目：葡萄球菌和链球菌的分离鉴定姓名：阿芳学院：动物科技学院专业：动物科学班级：201X级X班学号：（201XXXXX）指导教师：任慧英完成日期2014年3月22日葡萄球菌和链球菌的分离鉴定摘要目的：对实验提供的A、B两种细菌进行分离鉴定。主要方法：通过对细菌的分离培养，形态的观察以及生化反应的现象等方法进行鉴定。关键词：葡萄球菌；链球菌；分离鉴定引言源自李一经.兽医微生物学【M】.北京：高等教育出版社，2011，第五章病原球菌。葡萄球菌是一群革兰氏阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状，故名。

2、多数为非致病菌，少数可导致疾病。葡萄球菌是最常见的化脓性球菌。无鞭毛，无荚膜，不产生芽胞，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧。28～38℃均能生长，致病菌最适温度为37℃，PH为4.5～9.8，最适为7.4。在琼脂平板上形成圆形凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，不透明的菌落。葡萄球菌在血琼脂平板上形成的菌落较大，有的菌株菌落周围形成明显的完全透明溶血环（β溶血），也有不发生溶血者。多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产生气。致病性菌株能分

3、解甘露醇。葡萄球菌在自然界中分布很广，健康禽类的皮肤、羽毛、眼睑、粘膜、肠道等都有葡萄球菌存在。链球菌是化脓性球菌的另一类常见的细菌，常排列成链状，无芽胞，无鞭毛，有菌毛样结构，革兰氏染色阳性。需氧或兼性厌氧，有些为厌氧菌。营养要求较高。普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。最适温度37℃，最适PH7.4～7.6，血琼脂平板上形成灰白色、有乳光、表面光滑、边缘整齐、直径0.5—0.75mm的细小菌落，不同菌株有不同溶血现象。根据在血琼脂培养基上的溶血特征可分为三种不同类型：α型溶血性链球菌又称草绿色链球菌

4、，菌落周围出现草绿色溶血环，致病力弱。β型溶血性链球菌产生强烈的溶血毒素，在血琼脂培养基上，可使菌落周围出现宽2～4毫米、界限分明、无色透明的溶血环，致病力强。γ型链球菌不溶血。能发酵简单的糖类，产酸不产气。链球菌与葡萄球菌不同，不产生过氧化氢酶。广泛分布于自然界和人及动物粪便和健康人鼻咽部，大多数不致病。1材料与方法1.1材料两种未知的细菌分别为A菌、B菌。1.2培养基1.2.1普通琼脂培养基的制作（1）称量：牛肉膏1克、蛋白胨2克、NaCl1克、蒸馏水 200毫升于烧杯中。（2）溶解：搅动，加热溶解。（3）调节

5、pH值：用NaOH溶液或HCl溶液来进行调节。调pH 为7.5。（4）分装：将制好的培养基分装入烧瓶或试管内，塞上瓶塞，用牛皮纸包扎瓶口。在121℃高压蒸汽灭菌20～30min即成。（5）制作平板:将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下瓶塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入3mm厚度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，即可接种。1.2.2血琼脂培养基的制作（1）兔子心脏取血：取一只兔子，找到心跳最

6、快的位置，先用碘酒棉擦，再用酒精棉擦。垂直于兔子的心脏将已有0.5ml柠檬酸钠溶液的一次性针管插入，抽取血液到5ml处。（2）制作血平板：按照1.2.1的方法制作普通琼脂培养液，至不烫手后，向装有普通琼脂培养液的锥形瓶里注入3ml,混合均匀。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下瓶塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入3mm厚度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，即可接种。1.3细菌的划线分离1.3

7、.1平板的用途（1）供分离划线；分离划线的目的是为了得到单个菌落，以备进一步鉴定。（2）扩大培养，得到更多的菌苔。1.3.2无菌操作 培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种环等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品菌）于培养基上。1.3.3分区划线四个方向用接种环蛇形分区划线，每划一次之前都要先用酒精灯灭菌，且操作要在无菌环境下进行。2结果与分析2.1普通琼脂平板2.1.1A、B菌的生长情况如图1图12.1.2A、B菌的生长情况分析葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好。链球菌营养要求较高，在普通培养基上生

8、长不良。可以初步断定A菌可能为链球菌，B均可能为葡萄球菌。2.2血琼脂平板2.2.1A、B菌的生长情况如图2图22.2.2A、B菌的生长情况分析葡萄球菌在血琼脂平板上形成的菌落较大，菌株菌落周围形成明显的完全透明溶血环（β溶血），链球菌营养要求较高，血琼脂平板上形成灰白色、有乳光、表面光滑、边缘整齐的细小菌落。可以初步断定A菌可能为链球菌，B均可能为葡萄球菌