兰花的组织培养技术2(2)

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1、兰花组织培养技术赵文倩（酒泉职业技术学院生物工程系09园艺735000）摘要：在适宜的条件下，将兰花植株的外植体在无菌环境中应用人工培养基，通过外植体的采集与处理、培养基的制作、外植体的接种、继代增殖以及驯化移栽等操作技术，可在短期内获得大量幼小的无病毒植株，从而达到增殖扩繁的目的。组织培养技术是经济有效快速繁殖优良品种的方法，也是产生脱毒苗的重要途径。关键词：组织培养兰花外植体试管苗花属兰科多年生草本植物，中国兰花为兰科属中的地生兰。其香味怡人，花色淡雅，品种丰富，素有“花中君子”之称。具有很强的观赏价

2、值和经济价值，深受人们的喜爱。此外，其也是目前世界上栽培较广的切花材料之一，兰花的切花生产，需要大批量的种苗，要获得优质高产，兰花种苗必须具备种性一致，生长齐一，长势旺盛的特点。在种苗生产上运用最广泛的是组培快繁和分株。生产实践证明，运用组织培养快繁技术生产种苗，其长势旺盛，品种复壮，抗病性强，切花质量好，对加快优良品种的培育，挽救珍惜濒危种类等起到十分重要的作用。兰花在植物分类学上属于单子叶植物中的一个科，为多年生草本植物，附生、地生或腐生。兰花根呈圆柱状，属肉质组织，茎很短，高度约为2～3cm，兰叶大

3、多叶边全缘，有的略有锯齿。其花属于不整齐花范畴，总状花序。兰属植物的果实为蒴果，呈三角或六角形，俗称“兰荪“。一、无菌培养物的建立（一）培养容器的洗涤及培养基的制作1.培养容器的洗涤容器的洗涤是否干净直接影响组织培养的成败，为保证培养材料在瓶内生长健壮，在培养前期一定要对容器进行彻底的洗涤与灭菌。以达到“瓶壁锃亮、水膜均匀，不挂水珠”为标准。洗涤时用洗衣粉水洗刷，再用清水冲洗3～4次，干燥后备用。2.培养基的制作培养基是植物组织培养的“血液”，血液的成分及其供应状况直接关系到外植体的生长于分化。组培快繁中

4、最常用的培养基主要是MS培养基。母液要根据药剂的化学性质分别配置，一般配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类母液。其配置方法是先进行大量元素的配置，称量时应注意多余的药品不能回放在瓶中，应做其它处理。电子天平在使用时先对其进行调平，然后进行微量元素母液、有机物母液的配制。当MS母液配好以后，则可进行培养基的制作，继之对琼脂和蔗糖进行称取、溶解，琼脂呈现半透明状时将糖加入容器中溶解，再加入事先吸取好的各类母液混合均匀后转入1L容量瓶中对其进行定容，然后根据培养基的要求对PH进行调整（PH值控制在5.6

5、～5.8测定不得少于3～4次）。进行分装时，一般以培养瓶的1/4～1/3为宜，分装后立即进行灭菌。培养基采用湿热灭菌法，把分装后的培养瓶置入高压锅中进行高温高压灭菌。当压力升至0.11MPa(温度121℃）时，维持15～30min,即可达到灭菌的目的。（二）外植体的采集及接种1.外植体的采集外植体的采集是依据不同的培养目标而异。通常选取一些生长健壮的当年生枝条、饱满而未萌芽的侧芽作为外植体。其取材季节对于大多数植物而言，都应在生长开始的季节采样，对于利用茎尖培养的植物一般材料越小成活率越低，所以茎尖培养成

6、活的临界大小应为一个茎尖分生组织带1～2个叶原基，约为0.2～0.3mm,茎段长约0.5cm。2.外植体的清洗待外植体采回后，先用流水冲洗半小时左右，使其表面吸附物消除，在转入其他容器中加上洗涤剂进行清洗；在将易感染的各部分剥去、洗净，再切去上部幼叶。3.消毒与接种接种是组织培养是否成功的关键因素。接种前必须对接种室、接种人员，接种材料进行彻底的消毒与灭菌。针对外植体的灭菌处理，则先将外植体在75%的酒精中浸10s，再用蒸馏水冲洗三次。再剥取2～3片叶，放入5%次氯酸钠水溶液5min，再用无菌水冲洗3～4

7、次，剥至留下最后一枚叶片，以生长点为中心切去0.3～0.4cm的方块，将切下的外植体接入准备好的培养瓶中进行培养。外植体经消毒接入启动培养基或者诱导培养基中诱导出花芽，再转入继代培养基中，则诱导产生簇生的原球茎。4.培养培养温度为20～25℃，每天12～16h，光照强度为1000～2000Lx。二、继代增殖经适宜培养后，约4～6周后可在外植体周围形成许多球状物，即原球茎，将其分割接入培养基中，以促使嫩茎长出更多的原球茎，从而分化培养成苗。切取茎尖时要带两个左右叶原基，茎尖大小对增值速率也有影响，同时，继代

8、周期对原球茎增殖也有影响原球茎随继代周期的延长而增加。（一）试管苗生根壮苗培养在生根培养基中，转入单株生长或单株丛生的无根小苗培养其生根。生根培养基多采用1/2MS培养基，加入适量生长素。当小植株生出3～5条水平根，每根长2～3cm时为最适宜的出瓶炼苗阶段。通常将其从根状茎基部切下转入壮苗培养基中培养，培养温度提升至28℃，当苗长至12cm高，具有3～4片真叶时就可以移栽。（二）试管苗的驯化移植试管苗驯化移植是组培快繁的重要环