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1、中药10—1冯婷婷国商10—1左芳兰花的植物组织培养春兰兰花的组织培养兰科(Orchidaceae)是有花植物中最大的一个科,约有800属,25000～30000种,广泛分布于全球各地。兰花是整个兰科植物的总称,常见的有春兰、蕙兰、建兰、蝴蝶兰、石斛、卡特兰,文心等,其花具有极高的欣赏价值和经济价值。有些种类如天麻等则具有极高的药用价值。兰花的组织培养始于20世纪60年代。Morel[1]采用大花蕙兰的茎尖,在含有细胞分裂素的KC培养基上进行培养,茎尖分生组织膨大形成原球茎,并分化出根和叶,首次获得兰花无病毒
2、小植株。目前大约已有60余属数百种兰花可以用组织培养的方法进行繁殖。组织培养程序与外植体选择种子、离体胚类原球茎原球茎根状茎不定芽根、芽生根小苗愈伤组织胚状体丛生不定芽诱导根小苗种子、胚形态建成途径用于兰花离体繁殖的外植体材料很多,通常选择有新芽、幼叶、茎尖等。茎尖是最早用于兰花快速繁殖的外植体。大花蕙兰(Cymbidium)、嘉德丽亚兰(Cattleya)、石斛兰蝴蝶兰(Phalaeanopsis)、文心兰(Oncidium)等首先在茎尖培养中取得成功[2]。侧芽的应用也很广泛,一般认为带1～2个叶原基的茎
3、原椎成活率高,中间部位侧芽成活率及生长率较高。但因为有的兰花只生一茎,摘取茎尖就有可能丧失母株,因此,人们在更大范围内寻找外植体。用叶片作外植体可以减轻或避免对母株的伤害。大多数以叶片为外植体的成功报道是取试管苗的幼叶为培养材料,从成熟植株上取幼叶为外植体培养成功的报道不多。有研究指出:蝴蝶兰试管苗幼叶原球茎发生率可达90%,而成熟叶对诱导反应极弱[。这可能是由于成熟植物组织向培养基中释放高浓度的抑制生长物质,严重影响兰花组织的存活。现已报道的蝴蝶兰外植体材料各异,不同的外植体其诱导的效率也不同…培养基与激素
4、适量的提取物，如在培养基中添加番茄汁、蛋白胨、酵母提取液、水解蛋白、苹果汁、香蕉汁等可促进兰花种子的萌发。附加香蕉泥对原球茎的增殖有明显的促进作用。香蕉匀浆物在KC培养基和White培养基是最适合原球茎增殖的添加物。水解酪蛋白对于原球茎的增殖有明显的促进作用。81。另外，胰蛋A胨、酵母提取物和KC培养基一起使用对原球茎的增殖有促进作用，但酵母提取物在White培养基上使用，对原球茎的增殖却有抑制作用组织培养中常用的有机添加物如椰子汁、香蕉和马铃薯等是一类含有氨基酸、激素和酶等有机成分较为复杂的天然复合物。多数
5、研究证明,它们对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用。用于兰花组织培养的培养基种类繁多,常用培养基有:KC、MS、VW、BM及改良型。兰花的培养方式包括固体培养、半固体培养和液体培养3种。固液相培养基对不同种属兰花的效果不同。陈振光对蕙兰属的研究中发现,应先将外植体接种在固体培养基上,诱导原球茎的形成,然后在液体培养基中震荡培养,可快速繁殖原球茎。毛碧增等对建兰的研究中发现,用液体悬浮培养可提高原球茎的增殖率。杨玉珍等在对大花蕙兰的研究中发现,半固体培养基(减少琼脂用量)最佳,原球茎增殖最大,色泽深绿,健壮
6、。吕永杰等认为,在兰花的整个生产过程中,可以采用3种培养方式相结合的方法,即利用半固体培养或液体培养进行原球茎增殖,利用固体培养分化和生根,增加繁殖系数,降低污染,减少成本,利于大规模生产。培养方式对蝴蝶兰的快繁中研究发现,在蝴蝶兰的组培过程中,不同光照时间对愈伤组织的形成所需的时间、数量、原球茎的大小、愈伤组织的颜色都有很大的影响。连续24h光照,可以在短期内得到大量的直径较大的原球茎状体。在蝴蝶兰叶片诱导培养中,光照为其他培养基反射过来的弱散射光,光照时间为每天12h。适当剂量的紫外光照射对兰花原球茎的增
7、殖与分化有促进作用,过高剂量的紫外光照射则抑制原球茎的增殖与分化。在蝴蝶兰的组培过程中,温度过低,形成原球茎状体所需时间较长,生长较慢;温度较高,容易造成污染且易褐变,所以选择合适的培养温度是必须的。通过研究认为,对蝴蝶兰试管苗的培养温度为25℃培养条件谢谢
