尿液蛋白质定量测定方法及临床意义

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1、尿液蛋白质定量测定方法及临床意义【摘要】正常人尿液中含有微量的蛋白质,每天排出量在150mg以下,其中以白蛋白占多数,随不同病种有一定量的球蛋白和其它蛋白。随着肾病科研工作的开展,以观察患者每天排出蛋白质的量以示病情的变化,因此尿液蛋白质定量在临床上有实际应用价值,已成为医院化验室常规的检验项目。【关键词】尿液蛋白质检测1丽春红-S法尿液标本中的蛋白质与丽春红-S染料混匀后一起被三氯醋酸沉淀，将沉淀物溶解于碱性溶液中，此时溶液呈紫色，显色深度与蛋白质浓度成正比。1.1试剂三氯乙酸-丽春红-S试剂原液：称取丽春红-S1

2、.0g，加入到1000ml300g／L三氯乙酸中溶解。三氯乙酸-丽春红-S试剂应用液：将原液用蒸馏水按1：10稀释，放置室温稳定数月。蛋白定性试剂。0.2mol／L氢氧化钠溶液。蛋白标准曲线：把定值蛋白稀释成不同的浓度，按操作测定其吸光度，以吸光度为横坐标，以稀释后的蛋白浓度为纵坐标绘制标准曲线。1.2操作先做尿蛋白定性试验，以适当稀释标本。在试管中加入100μ6l标本，再加入1ml三氯乙酸一丽春红-S应用液，混匀后以3000r／min离心15分钟，吸去上清液，倒置于洁净滤纸上。在沉淀中加入0．2mol／L氢氧化钠溶

3、液lml，用560nm波长测定其吸光度，查标准曲线的蛋白含量。1.3参考值46.5±18．1mg／L1.4注意事项：尿液如被稀释应乘以稀释倍数。尿中血红蛋白含量>5mg／L时影响结果。离心后上清必须全部弃去，若沉淀中夹带有丽春红-S影响比色结果。2双缩脲比色法以磷钨酸乙醇溶液沉淀尿中的蛋白质，在碱性介质中蛋白质与铜离子形成紫红色络合物，与标准液比色即可得出尿中蛋白质的含量。2.1试剂蛋白沉淀液：称取磷钨酸7.5g，加入30ml蒸馏水、95％乙醇385ml、浓盐酸25ml。双缩脲液：(1)称取枸橼酸钠34．6g，

4、无水碳酸钠20g，加入120ml蒸馏水使其溶解；(2)称取硫酸铜3．46g，加入20ml蒸馏水使其溶解。将(1)、(2)混合，加入蒸馏水至200ml，备用。0．75mol／L氢氧化钠溶液。蛋白标准液(1．5g／L)：称取150mg结晶型冻干人血清白蛋白，加入100ml的3g／L苯甲酸溶液溶解。2.2操作取5ml24小时混合尿液，2500～3000r／min离心5分钟，取上清备检。混匀放入56℃水浴15分钟，取出后离心，倾上清留沉淀。0．75mol／1NaOH1．51．51．56双缩脲液0．1　0．1　0．1各管混匀置

5、室温10分钟，在540nm波长，以空白管调“0”比色。2.3结果计算尿蛋白含量(g／L)=测定管吸光度÷标准管吸光度×1．52.4参考值<150mg／24h尿、2.5注意事项：记录24小时尿量，将尿液混合后再离心。先做尿标本蛋白定性试验，若为阳性再做本试验。尿蛋白浓度较高时应稀释标本再操作。若疑有药物干扰时，可将尿蛋白沉淀物用无水乙醇洗涤3次再操作。3考马斯亮蓝法在酸性介质中考马斯亮蓝与尿液中的蛋白质NH3+基团结合，发生由棕色到蓝色的颜色变化，光谱吸收峰由465nm移至595nm。与标准液相比即可测出尿蛋白质

6、含量。3.1试剂考马斯亮蓝溶液：(1)称取75mg考马斯亮蓝G-250溶于40ml甲醇中；(2)加入蒸馏水800ml、85％的浓硫酸100ml、浓盐酸5ml；(3)称取30mg十二烷基磺酸钠，溶于(2)中；(4)加蒸馏水至1000ml，用滤纸过滤至棕色瓶中，室温保存。蛋白标准液(1g/L)以3g/L苯甲酸溶液稀释蛋白质标准。3.2操作留取24小时尿标本混匀，取5ml尿液离心后取上清备检。室温放置5分钟，以空白管调“0”，波长600nm读取光密度。63.3结果计算尿蛋白质含量(g／L)=测定管吸光度÷标准管吸光度×1．

7、03.4参考值(20．6～172．6)mg／24h3.5注意事项：考马斯亮蓝溶液要定期新鲜配制，过滤后才可使用。测定标本时应同时测定蛋白质标准管。尿中的水杨酸类药物、麝香草酚和去污剂等可产生颜色干扰。尿标本蛋白质定性试验在(+++)以上需稀释后测定。4微量蛋白检验尿液微量蛋白包括纤维蛋白降解产物、尿α1微球蛋白、尿α2微球蛋白、微量白蛋白等。4.1纤维蛋白降解产物(fibrinogendegradationproducts，FDP)FDP是纤维蛋白(原)经纤溶酶作用降解的产物。其检测现多用免疫学方法：免疫胶乳凝集法和

8、ELISA法。正常人尿液无FDP。当肾脏及尿路局部炎症时，其渗出的少量纤维蛋白经纤维蛋白溶解酶降解，产生FDP。当肾小球病变至肾小球滤过膜通透性增高时，FDP碎片排于尿中。血液FDP增高时，尿液FDP排泄也增多。4.2α1-微球蛋白α1-微球蛋白(α1-microglobulin，α1-M)是一种小分子量糖蛋白，由肝脏与淋巴细胞合成，广泛存在于