两种检测淋病奈瑟菌方法的比较

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1、两种检测淋病奈瑟菌方法的比较【关键词】PCR；淋病奈瑟菌；淋球菌培养　　［摘要］目的：比较两种检测淋病奈瑟菌（NG）的方法。方法：采用荧光定量PCR检测法和NG培养法。对155例临床分泌物标本同时进行检测。结果：荧光定量PCR检测阳性率15.5%，培养方法阳性率4.5%.。两者比较PCR方法阳性率显著高于培养法（P<0.05）。结论：对NG的检测，荧光定量PCR检测法更适合，并且可有效减少假阴性。　　［关键词］PCR；淋病奈瑟菌；淋球菌培养　　淋病是国内外最常见的性传播疾病之一,它严重影响着人们的身心健康,其病原体为淋病奈瑟氏菌(简称淋球菌，NG)。检测淋球菌的方法有很多，

2、最主要的现在是聚合酶链反应（简称PCR）和细菌培养法两种。2005年下半年我们对155例门诊疑似患者取样进行了这两种方式的比较，通过统计学处理认为FQPCR法提高了淋球菌检测的准确性，也减少了淋球菌的漏检率。　　1　材料与方法　　1.1　材料5　　1.1.1　标本来源与采集　　　　　　　　标本来源于我院2005年9月至12月日常妇科门诊和男性科门诊及泌尿外科门诊的155例疑似患者，年龄最大的59岁，最小的18岁，其中女性患者96例，男性患者59例。标本采集：男性用无菌拭子由前尿道2cm~4cm处取尿道分泌物，根据病情需要，也可取前列腺按摩液或精液。女性用女性拭子在宫颈管内1cm~

3、2cm处取宫颈分泌物，在取宫颈标本时，应先用拭子将宫颈揩干净，再用另一个拭子取材。用拭子取材时，要在宫颈（或尿道）内旋转并至少停留20s以上，以便获得较好的细胞。　　1.1.2　仪器及试剂盒　　　　　　　　　荧光定量PCR仪为美国生产的ABI7000型，所用PCR试剂盒为深圳匹基生物工程股分有限公司生产；生物梅里埃公司生产的APINH奈瑟氏菌及嗜血杆菌鉴定系统。　　1.2　方法　　1.2.1　荧光定量PCR法　　　　　　　　　取100μl待测样本，加入100μlDNA提取液1，振荡混匀。13000r/min离心155min，吸弃上清（离心时注意离心管方向，尽可能吸弃上清且不碰沉淀

4、）。加入50μlDNA提取液2，振荡混匀。100℃干浴10min，13000r/min离心10min，保留上清待用（如标本裂解产物当天不使用，则保存于-20℃。按试剂盒配制试剂，加入处理好的标本上机进行PCR扩增。循环条件设置：37℃：5min;94℃:1min;95℃:5s,60℃:30s,40个循环。反应体系设为40μl。　　1.2.2　NG菌培养　　　　　　　　　采用淋球菌巧克力培养基，按试剂盒操作要求将拭子进行接种，在5%CO2温箱35℃培养48h~72h。挑取可疑菌落进行革兰染色，如镜检可见革兰阴性肾形双球菌，则进行APINH奈瑟菌鉴定系统鉴定。该系统利用标准化及微量化

5、试验并拥有与之相适应的数据库。APINH试验条有10个微孔管，内有干燥基质，可进行12项鉴定反应（酶反应或糖发酵），并能测青霉素酶。孵育时所发生的各种反应可通过自发或加入试剂后颜色改变测出。在35℃~37℃培养2h后即可目视判读。参照使用手册的反应模式表即可得到结果。　　1.3　统计学处理　　　　　　　　　对155例疑似患者所进行的荧光定量PCR法和细菌培养法检出率的比较分别用χ2检验。5　　2　结果　　见表1。表1　两种方法检出结果（略）　　3　讨论　　NG是常见的性传播性疾病病原体，主要通过性接触直接感染泌尿生殖道、口咽部和肛门直肠黏膜，或在分娩时通过产道感染新生儿，临床表现

6、为：单纯性淋病，临床症状为尿频、尿急、尿痛，尿道口脓性分泌物；子宫颈红肿、阴道分泌物增多和排尿困难；盆腔炎，表现为子宫内膜、输卵管、盆腔的淋菌性炎症；口咽部和肛门直肠病；淋菌性结膜炎，发生于新生儿产道感染，眼部大量脓性分泌物，治疗不及时可致盲；播散性淋病表现为畏寒、发热、皮肤损害和关节炎症，少量患者可致化脓性关节炎和脑膜炎。培养法检测NG，用于分离培养的标本直接接种于营养培养基中，立即置于5%CO2气体条件下35℃~37℃孵育48h~725h，再进行鉴定。虽然培养法的特异性和准确性都非常高，但由于标本取材不理想及标本中混有其他杂菌及NG离体后易死亡等因素均可能影响该菌的阳性检出率

7、。漏检率因此也相当高，且不易作出早期诊断，临床医生不欢迎使用该法。荧光定量PCR法检测NG属一种基因诊断技术，它借助于一种DNA扩增技术，能将含微量的淋球菌标本处理扩增。自2002年1月卫生部下发了有关基因扩增检验技术临床应用的法规性文件《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发［2002］10号）和卫生部临床检验中心配发的《临床基因扩增检验实验室工作规范》（卫检字［2002］8号）以来，对临床PCR实验室进行了规范化管理和验收。在日常工作中严格执行质量保证体系中各种标准操作