产无色胞外多糖菌株的筛选及其产物鉴定

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1、产无色胞外多糖菌株的筛选及其产物鉴定产无色胞外多糖菌株的筛选及其产物鉴定那淑敏贾盘兴余茂薪(中匡科学院散生物研究所,北京)摘要从加拿走切叶蜂虫茧上分离到36株短梗霉,其中8株可翟度不等的分泌晦外多糖.此多糖经吏链淀粉酶(PuIlulaaaseE.c.3.2.1.41)酶解产生麦芽三糖,酸水解产生葡萄糖,并与标准品的RF值相同.从而证明多糖为麦芽三糖通过I_÷6糖苷键连结聚台的出芽短梗胞糖(po.IIulan).它们可利用蔗糖,糖蜜作碳潦分泌短梗晦糖,糖的转化辜为2s一32%.关键词出芽短梗霉;麦芽三糖;出芽短梗胞糖1938年Bauer发现短梗霉能分泌胞外粘性物质

2、.1958年Bernier,Bender和Wallenfels-2l等从特制培养基中分离出胞外多糖并对其结构和性质进行研究.近年来,人们对其在食品,医药,化妆品等方面的应用进行了大量的研究.比较系统的研究是生产工艺和产品应用,在这方面日本已取得不少专利.目前已工业彳七生产不同规格的pu1产品".淡家林等对AS3.2756的变异株N28进行了发酵条件及中型扩大试验.谷才恩和杜立生也分别从广西桂林马尾松枯针叶和海水中,分离到产胞外多糖的短梗霉.为了开发多菌种和优良的产胞多糖菌株,我们从加拿大切叶蜂虫茧上分离到几株产无色胞外多糖的菌株,对菌株及盥生卜产物进行了研究.一

3、材料和方法1.菌株:出芽短梗霉(Aureobasidumpullulans)AS33984由本所保藏室提供,编号A1到A36菌株分离自加拿大切叶蜂虫茧.2.培养基:菌种保藏用马铃薯和麦芽汁培养基,发酵培养基分别以5—10%的蔗糖和糖蜜为碳源,配以0.03瞄的硫酸铵及0.01瞄的硫酸镁组成.3.菌种的筛选:用250ml三角瓶盛40—50ml培养基,接人生长48—72h的菌种一环,置28℃,200r/rain的旋转摇床上培养5—6天,离心取上清液测定多糖.4.形态观察:用PDA和麦芽汁培养基进行斜面,平板培养,定期观察菌苔,菌落质地,颜色,菌落大小,生长速度.细胞形

4、态用显微镜观察.5.多糖的测定见文献[6].6.胞外产物鉴定:用薄层及纸层析鉴定产物.7.材料:支链淀粉酶由本所扬寿钧及无锡酶制剂厂提供;标准茁霉多糖为日本林原公司出产;麦芽三糖为美国Sigma公司产品;层析硅胶板GF产自浙江黄岩化学试验厂.结果(一)菌株的筛选分离的36株短梗霉(Aureobasidum)经培养测试,其中8株有不同量的胞外多糖产物,结果见表1.8株菌的发酵液自始至终为乳白色,发酵终pH降至3.5左右,稍粘稠,有芳香气味.离心上清液中加人乙醇后会出现长丝状,有弹性的白色胶状物'沉淀,可用玻璃棒搅出.低速离心上清液经2×10分子量中空纤维过滤浓缩,

5、可直接喷雾干燥得到白色粉末.它们可利用蔗糖,糖蜜作碳源,转化率为25—32%,糖蜜的转化率比蔗糖高.(二)培养特征的观察将产多糖的8株菌与AS3.3984分别在感谢棘诸,街寿钧,陈玉梅,江宁等同志的热情帮助.?7'囊l钮旆蕾株胞外参糖产量多糖菌株初始pH终pHrmg/】00m1)^】7286.03.5Ai83666.03.OA202j66.0j.2A211066.04.0A226536.0j.0A23l066.0j.5一306.0j.5A35l06.0j.5PDA和麦芽汁培养基上培养,对其培养特征进行比较.AS3.3984在PDA及麦芽汁斜面上生长2天后均变成黑

6、色皮革状.分离的8株菌在麦芽汁斜面上均为乳白色,奶油状,光滑湿润,有粘性.菌苔边缘有密细的绒毛状菌丝.除A21生长15天后全部变为黑色外,其余菌株均不变黑,呈粉褐色或棕褐色.在冰箱放置数月后,逐渐变成黑色皮革状.而在PDA斜面上生长的8株菌,放置数月仍保持乳白色,略显粉色光滑状.与谷才恩报道的1.0l5菌株性状不同._.■.在液体培养基中,培养24小时的AS3.3984就已变成黑色,镜检有l/3黑色粗大菌丝及厚垣节孢子.随培养时间加长,黑色菌丝,节孢子增多.A22等8株菌的发酵液始终为乳白色,即使摇床培养11天也无色素产生.镜检观察均以酵母型细胞存在,不产生厚垣

7、孢子和节孢图1出芽短梗霉A22菌株的菌落形惠(培养72小时).8'子.培养48小时的A22菌落为白色,中凸表面光滑,湿润,边缘有绒毛状菌丝.随培养时阃增加,菌落长大扩散,96小时直径已有12～1.3cm,几乎扁平,中心白色,周围色淡,有同心圈,边缘菌丝加长(见图1).AS3.3984培养4小时为肉色雪花状,边缘不太齐,有绒毛状菌丝,中间湿润,也有颜色深浅不同的同心圈,96小时成黑褐色,直径1.7—2.2cm,比A22生长快.(三)细胞形态观察对AS3.3984和多糖产率较高的A22的细胞形态进行了比较,结果表明,两株菌均具有酵母型及菌丝型形态特征.A22酵母型细

8、狍呈椭圆形,大小为(5)