感染性疾病的血液筛查及确认

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1、感染性疾病的血液筛查及确认方法简介珠海丽珠试剂股份有限公司储迅涛博士尽可能提高检测的敏感性，使之达到或接近100%，从而减少输血的残留风险，保证输血及血液制品的安全在保证敏感性的前提下，提高检测的特异性，减少血缘的浪费血液筛查试剂的要求免疫测定结果可能出现假阳性在感染性疾病血清学检验常用的定性ELISA试验中，测定样本的A值≥Cut-off（反应性），但样本中可能并不存在病原体的特异性抗体或抗原通过确认试验证实样本中存在病原体的特异性抗体或抗原，从而排除假阳性的情况，避免献血员不必要的丢失为什么要

2、做确认试验阳性判断值（Cut-off）的设定内源性干扰外源性干扰试剂质量和实验操作的不精密度导致假阳性的因素灰区（GREYZONE）在免疫测定中，按Cut-off确定结果为阳性或阴性时，有一个可能出现假阳性或假阴性的范围。这个范围与试剂的质量有关，应由试剂生产单位在确定Cut-off值时确定，需要时在说明书中注出。灰区的确定阴性Cut-off和阳性Cut-off之间的区域阴性标本5000份均值0.06标准差0.019Cut-off0.11(99.5%可信限)阳性标本2000份均值1.50标准差0.

3、628Cut-off0.08(99.5%可信限)ELISA测定的“灰区确定”补体高浓度的非特异性免疫球蛋白嗜异性抗体某些自身抗体内源性因素标本溶血：血红素基团有类似过氧化物的活性标本污染：细菌的内源性酶会产生非特异性干扰标本贮存时间过长：标本在2~8℃下保存时间过长，IgG可聚合成多聚体，在间接法ELISA测定中会导致本底过深，甚至造成假阳性标本凝固不全：血液通常30分钟开始凝固，18~24小时完全凝固，日常检验时血液还没有完全凝固就分离血清，此时分离出的血清中残留部分纤维蛋白原，检测结果易造成假

4、阳性试剂盒原材料的纯度、组合、来源等也会造成结果的假阳性或假阴性外源性因素测定方法的不精密度实验操作、样本采集、样本前处理、试剂质量等诸多因素其它因素尽可能提高检测的特异性，使之达到或接近100%在保证特异性的前提下，提高检测的敏感性，尽可能少出现不确定的结果，避免过多的随访确认试剂的要求乙型肝炎病毒（HBV）的筛查及确认酶免疫测定（ELISA）放射免疫测定荧光免疫测定化学发光免疫测定金标记快速免疫测定常用的HBsAg筛查方法敏感性：据文献报道，到目前为止在献血员中所发现的HBsAg携带者最低含量

5、为0.2ng/ml。国产ELISA试剂的敏感性水平多为0.5ng/ml左右，对极低含量的HBsAg携带者可能出现漏检或“灰区现象”突变株：编码HBsAg的S基因发生突变可导致HBsAg的a决定簇发生改变。如最常见的核苷酸587位发生G到A的点突变，可导致原来145位的甘氨酸残基由精氨酸残基取代，即G145R突变。突变可能明显影响HBsAg的抗原结构。a决定簇的氨基酸替换可导致其构型改变，这种改变可影响相应抗体的结合，从而出现HBsAg假阴性结果。目前的商品试剂盒对HBsAg突变株的测定能力可归为三

6、类：(1)突变HBsAg和野生型均可检出。(2)不能检出突变HBsAg。(3)与野生型抗原相比，突变HBsAg的检出能力明显降低钩状效应：血液中HBsAg含量最高可达2000000ng/ml，而HBsAg各种检测方法的线性检测范围上限均不超过50ng/ml，测定中有可能出现钩状效应（前带现象）特异性：目前的各种检测方法均有出现假阳性结果的可能性，这种情况在弱反应性的标本中更为常见。因此，有必要对HBsAg测定呈现有反应性（特别是弱反应性）的标本进一步进行确认试验HBsAg测定中的问题我国的药典及国

7、家药监局的新规均要求对HBsAg的测定采用两步法（或假两步法）采用两步法，特别是延长酶反应的时间可有效提高检测的敏感性，减少“灰区现象”采用两步法可完全消除钩状效应（前带现象）采用两步法，也可以明显提高检测的特异性HBsAg测定一步法与两步法的差别HBsAg测定结果的解释（国外试剂盒）AbbottMurex(ELISA)样本A值＜Cut-off(阳性判断值)非反应性(non-reactive)阴性结果(negativeresult)样本A值≥Cut-off(阳性判断值)(初检)反应性(reacti

8、ve)双份复检双份复检结果:1.反应性反应性2.非反应性反应性3.非反应性非反应性重复非反应性(阴性结果)重复反应性确认试验HBsAg测定结果的解释（国产试剂盒）国产ELISA试剂Cut-off：阴性对照A值×0.21样本A值≥Cut-offHBsAg阳性样本A值＜Cut-offHBsAg阴性在说明书中没有说明有灰区，没有说明需复检，也没有说明需确认国产试剂测定HBsAg结果的“临界范围”国产HBsAgELISA试剂通过批批检的精密度要求为CV＜15%。但由于运输和保存条件及测定操