NYT550-2002动物和动物产品沙门氏菌检测方法.pdf

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1、11.220IBC4S1NY中华人民共和国农业行业标准NY/T550-2002动物和动物产品沙门氏菌检测方法Defectionmethodsofsalmonellaforanimalandanimalproducts2002一08一27发布2002门2一01实施中华人民共和国农业部发布NY/T550-2002前言沙门氏菌是一种重要的人畜共患的肠道病原菌，也是引起食物中毒的重要病原菌，有重要的公共卫生意义。本标准的生化初筛和签定同步进行，血清凝集试验直接使用三糖铁琼脂斜面上新鲜菌苔做抗原。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位:厦门进出境检验检疫局

2、、福建省卫生防疫站。本标准主要起草人:李碧萍、孙福泉、谢一俊、林炳玲NY/T550-2002动物和动物产品沙门氏菌检测方法范围本标准规定了动物和动物产品沙门氏菌检测方法。本标准适用于动物和动物产品的沙门氏菌检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB4789.4-1994食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GR47R9.2R-1994食品卫牛微生物学检验染色法、培养

3、基和试剂检测方法11器材天平、均质器、乳钵、培养箱、广口瓶、试管、吸管、平皿、玻棒。3.2培养基和试荆3.2.1缓冲蛋白陈水(BP):配制方法见GB4789.28-1994中4.1203.2.2氯化镁孔雀绿增菌液(MM):配制方法见GB4789.28-1994中4.13,3.2.3四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB):配制方法见GB4789.28-1994中4.14,4.1503.2.4亚硒酸盐胧氨酸增菌液(SG):配制方法见GB4789.28--1994中4.1603.2.5胆硫乳琼脂(deoxycholatehyadrogensulfialelactoseagar.DHL):配制方法见GB478

4、9-28-1994中4.2003.2.6苏木素伊红(HE)琼脂(hektoenentericagar):配制方法见GB4789.28-1994中4.213.2.7WS琼脂:配制方法见GB4789.28-1994中4.233.2.8三糖铁琼脂(TSD:配制方法见GB4789.28-1994中4.26或4.27.3.2.9氨基酸脱V酶试验培养基:配制方法见GB4789.28-1994中3.12,3.2-10邻硝基酚(3-D一半乳糖昔(ONPG)培养基:配制方法见GB4789.28-1994中3-L3.2-11甘露醇糖发酵管培养基(MAN):配制方法见GB4789.28-1994中3.2.3.2.1

5、2沙门氏菌因子血清:26种用于初步分型:163种用于详细分型。13采样及制备检样3.3.1依检测需要采集样品或按相关规定采样。3.3.2检样的制备:冷冻样品、固体样品需用匀质器以8000r/min-10000r/min打碎1min，或用乳钵研磨制成检样:液体样品、粉状样品用灭菌玻棒搅匀。3.4检测程序沙门氏菌检测程序见图1,NY/T550-2002检样制备样品25BlBP液225mL36'C士1'C116h一20h挑取可疑苗落TS1ONPG甘耳醉抢发醉管36℃士1'C1l6h-24h判定结果血清学鉴定图1沙门氏菌检测程序I5操作步骤3.5.1前增菌和增菌3.5.1.1冻品、蛋品、乳制品、鱼粉及

6、其他经加工的动物产品均应经过前增菌。称取制备样品25g，加人装有225m1,BP液的广口瓶中，用无菌玻棒搅匀，36C士1℃培养16h-20h前增菌。移取Im工转种于10mLTTB或MM增菌液中，42℃培养18h-24h。另取1ml转种于lOmLSC增菌液中，36C士1'C培养18h-24h.3.5.1.2鲜肉、鲜蛋、鲜乳及其他未经加工的动物产品或动物新鲜病料不必经过前增菌。称取检样，以1:10比例加人TTB(或MM)增菌液和SC增菌液。分别用42'C和36'C两种温度培养。采集粪便、禽肠内容物的棉拭子可直接投人10mL上述增菌液中培养。分离培养取一接种环增菌液划线接种于DHL[或HE琼脂或WS

7、琼脂口琼脂平板上。36℃士1C培养18h-24ha观察平板上菌落生长形态。沙门氏菌各亚种在选择性平板上菌落特征见表1eNY/T550-2002表1沙门氏菌属在选择性平板上菌落特征沙门氏菌亚种I,A,N,V,VI亚种.〔乳糖阴性或选择性琼脂平板沙门氏菌亚种m(乳糖阳性菌株)迟缓阳性)无色半透明;产硫化氢(H,S),菌落中心黑色或几乎粉红色，产硫化氢，菌落中心黑色或几乎全DHL全黑色黑色半透明蓝绿色或