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1、角叉菜化学成分及抗菌和免疫活性研究烟台大学硕士学位论文角叉菜化学成分及抗菌和免疫活性的研究姓名:孔娜娜申请学位级别:硕士专业:生物化工指导教师:王长海2011-06摘要角叉菜含有多种营养物质如多糖、蛋白质、氨基酸、脂肪酸、维生素、矿物质和微量元素等,起着促进机体正常生长发育和保证机体健康的作用,角叉菜不仅是卡拉胶生产的重要原藻,而且近年来越来越多地应用于医药领域,引起人们的广泛关注。本文对烟台、长岛、青岛、大连四个地区的角叉菜各营养成分进行分析,然后通过GC-MS、硅胶柱层析、葡聚糖凝胶SephadexLH-20柱层析和重结晶
2、等方法对角叉菜的化学成分进行了系统的分析和分离,并对角叉菜各提取物的抗菌和体外免疫活性进行研究,主要研究内容和结果如下:(1)碳水化合物是构成藻体的主要成分,占藻体干重的50.6%~60.8%;粗纤维含量最少,占藻体干重的1.5%~2.1%;粗蛋白、粗脂肪、灰分、水分分别占藻体干重的12.2%~14.7%、3.8%~5.6%、17.5%~21.9%、6.6%~10.8%;氨基酸含量高,其中以天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸和精氨酸的含量居多,必须氨基酸的含量占氨基酸总量的35.1%~39.9%;不饱和脂肪酸含量
3、很高,各地区角叉菜中不饱和脂肪酸的总和占总脂肪酸的46.6%~63.3%;微量元素丰富,特别是人体必需微量元素Fe、Cu、Zn的含量高,而对人体有害的重金属元素As、Pb、Cd、Hg和Cr含量低。(2)用气质联用法分析角叉菜提取物中的化学成分,石油醚萃取物中共分析鉴定出35种物质,乙酸乙酯萃取物中分析鉴定出15种,正丁醇萃取物中分析鉴定出10种。综合利用各种色谱学方法(硅胶柱层析、凝胶SephadexLH-20柱层析以及重结晶等)对角叉菜中的化学成分进行分离,得到9种物质,运用现代波谱技术(MS、113H-NMR、C-NMR、
4、DEPT)对化合物1、7、9种化合物的结构进行分析和鉴定,其中化合物1为(胆甾醇)3-β-羟基胆甾-5-烯,化合物7的主体结构为磷酸腺苷。(3)对分离得到的提取物和化合物进行抗菌活性进行测试,发现A、A3、A4、A6、A7、A8、B2、B3、B4、C2、C4均能抑制大肠杆菌的生长;A、A3、A4、A5、A6、A7、A8、B3、B4、C3对金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用;所有的物质均不能抑制面包酵母菌和假丝酵母菌的生长;遗憾的是化合物1、7和9在测试浓度下对测试菌株均未表现出活性。(4)石油醚相提取物的体外免疫活性要优于乙酸乙酯
5、相提取物和正丁醇相提取I物。石油醚相提取物A4、A5、A6、A9在一定浓度下可以促进小鼠脾淋巴细胞的增殖,有的增殖指数甚至超过了阳性药ConA,乙酸乙酯相提取物B1、B3和正丁醇相提取物C3、C4在一定的浓度范围内也可以促进小鼠脾淋巴细胞的增殖,但增殖效果均弱于阳性药。A3、A4、A5、A7、A9、B3、B4、C3、C4在一定的浓度范围内可以显著或极显著的促进巨噬细胞RAW264.7的增殖(P0.05或P0.01),呈现出一定的剂量依赖性。A2、A3、A4、A5、A6、B2、B3、C3、C4在一定的浓度范围内可显著或极显著地促
6、进小鼠单核巨噬细胞RAW264.7产生NO(P0.05或P0.01)。化合物1、7和9均没有体外免疫活性。关键词:角叉菜;化学组成;结构鉴定;抗菌活性;体外免疫活性IIAbstractChondrusocellatuscontainsrichnutrientsubstancesuchaspolysaccharides,protein,aminoacids,fattyacids,mineralsandtraceect.,whichisgoodforbody’sgrowthanddevelopment.Itisanimportan
7、teconomicallyvaluablealgaeandhasleadtomoreandmoreattention.Inthepresentdissertation,thenutrientcomponentsofChondrusocellatusfromYantai,Changdao,QingdaoandDalainwereanalyzed.ToinvestigatethechemicalconstituentsofredalgaeChondrusocellatus,compoundswereisolatedbynormal
8、phasesilicagelandSephadexLH-20gelcolumnchromatographyandrecrystallizationAntimircrobial,immunomodulatoryactitvitiesofChondrusocellatusextr
