表面微生物检测方法[1]

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1、空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准1、目的：检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。2、参照标准：中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979－1995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T18204.1－2000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN0169-92/SN0172-92/SN0170-92、出入境检验检疫局二000四年《出

2、入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。3、采样与检测方法：3.1空气的采样与测试方法3.1.1样品采集：(1)取样频率：a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。e)正常生产状态的采样，每周一次。（2）采样方法在动态下进行，室内面积不超过30m2，在对角线上设里、中、

3、外三点，里、外点位置距墙1m；室内面积超过30m2，设东、西、南、北、中五点，周围4点距墙1m。采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9cm)置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5min。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。3.1.2菌落培养：（1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养24h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。（2）将已采集样品的培养基在6h内送实验室，细菌总数于3

4、7℃±1℃培养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。（3）菌落计算：a)记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。b)若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。3.2工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法：3.2.1样品采集：(1)取样频率：a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车间卫生清扫消毒情况。b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。c)产品检验结果超内控标准时，应及时对

5、车间可疑处进行擦拭，如有检验不合格点，整改后再进行擦拭检验。d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。f)正常生产状态的擦拭，每周一次。（2）采样方法：a)工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取与食品直接接触或有一定影响的表面）取25cm2的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。b)工人手：被检人五指并拢，用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10

6、mL灭菌生理盐水的采样管内送检。（3）采样注意事项：擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间3.2.2细菌·大肠菌群的检测培养:样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。此液为1：10稀释液。如污染严重，可十倍递增稀释，吸取1ml1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。3.2.2.1细菌总数：（1）以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的平板计数琼脂培养基倾入平

7、皿，每皿约15ml，充分混合。（2）待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养48h后计数。（3）结果报告：报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数3.2.2.2大肠菌群：（1）平板法:a)以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的去氧胆酸盐琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml，充分混合。待琼脂凝固后,再覆盖一层培养基，约3-5ml。b)待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养24h后计数。c)结果计算：以平板上出现紫红色菌落的个数乘以稀释倍数得

8、出。d)结果报告：报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数（2）试管法:a)以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到BGLB肉汤培养基中，每个稀释度接种三管。b)置BGLB肉汤管于36℃±1℃培养48±2h。记录所有BG