quicktiter_慢病毒滴度试剂盒说明书

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1、QuickTiter™慢病毒滴度试剂盒（慢病毒HIVp24蛋白）产品说明书【产品名称】通用名：QuickTiter™慢病毒滴度试剂盒英文名：QuickTiter™LentivirusTiterKit(Lentivirus-AssociatedHIVp24)【包装规格】96人份/盒。【货号】VPK-10796次；VPK-107-55x96次。【简介】HIV-1慢病毒载体是基因转移研究中应用前景广泛的载体之一。慢病毒载体具有感染分裂期和非分裂期细胞的特性1-2。慢病毒包膜质粒引入VSV-G（水泡性口炎病毒包膜G）蛋白后使慢病毒感染寄主的范围扩大，可以向逆转录

2、病毒之前不能感染的细胞类型如神经元、淋巴细胞和巨噬细胞传递基因。同时，体外试验证明慢病毒对大脑、肝脏、肌肉、视网膜等并没有毒性和免疫反应。近年来，慢病毒系统被广泛应用于体内和体外的多种细胞系和原代细胞中的siRNA高效整合。慢病毒颗粒是由3~4个编码病毒组成部分的质粒通过瞬时感染293T细胞生产的。在感染48~72内可以收获含有病毒颗粒的包装细胞。为了确保假病毒的活力和控制每个靶细胞的中病毒的拷贝数，在进行转导试验之前需要确定病毒滴度。病毒滴度可以通过感染HT-1080细胞或者Hela细胞然后使用抗生素筛选稳定克隆。然而这种方法需要几周的时间培养大量的稳

3、定细胞株，然后进行细胞计数和病毒滴度的计算。HIVp24ELISA技术也被用于慢病毒样品的滴度测定，但这个方法检测的是慢病毒颗粒上p24和在瞬时转染过程中293T细胞的产生的游离的p24的总量。因此总p24的量（慢病毒p24和游离p24）并不能用于精确的慢病毒样品滴度的检测。CellBiolabs’QuickTiter™慢病毒滴度试剂盒（慢病毒HIVp24蛋白）是一种只检测和定量慢病毒HIVp24核心蛋白的酶联免疫试剂盒（参考下面的分析原理）。慢病毒HIVp24蛋白与ViraBind™慢病毒试剂（专利技术）可形成复合物沉淀，而游离的p24仍然在上清液中，

4、从而可用HIVp24ELISA.试剂检测慢病毒HIVp24蛋白含量。该试剂盒具有高灵敏度，可检测到浓度为1ng/mL的HIVp24蛋白，或者慢病毒样品中大约104到105TU/mLVSVG-假病毒。每个试剂盒都提供了足够的标准品和慢病毒样品，可完成96次试验。CellBiolabs’QuickTiter™慢病毒滴度试剂盒（慢病毒HIVp24蛋白）提供了一套高效快速定量检测病毒上清液和纯化病毒滴度的试剂。【技术原理图】【试剂盒成分】一、盒1（室温运输）产品英文名产品中文名产品编号包装1.ViraBind™LentivirusReagentAViraBind

5、™慢病毒试剂A3107011管1.0ml2.ViraBind™LentivirusReagentBViraBind™慢病毒试剂B3107021管1.0ml3.SampleDiluent样品稀释液3107031瓶，50ml，含0.5%的TritonX-1004.Anti-p24AntibodyCoatedPlateP24抗体包被板31080196孔板5.FITC-ConjugatedAnti-p24MonoclonalAntibodyFITC标记的抗p24的单克隆抗体3108101管，20µl6.HRP-ConjugatedAnti-FITCMonoclo

6、nalAntibodyHRP标记的抗FITC的单克隆抗体3108111管，20µl7.AssayDiluent检测稀释液3108041瓶，50ml8.10XWashBuffer10×洗涤液3108061瓶，100ml9.SubstrateSolution底物液，显色液3108071棕色瓶，12ml10.StopSolution终止液3108081瓶，12ml二、盒2（冰袋运输）1.Recombinantp24Standard（重组p24标准品，产品编号310809）：100µl，浓度为10µg/ml的热灭活的重组HIV1p24抗原，溶液为TBS+BSA。

7、三、未提供的材料1.病毒标本：纯化的病毒或未纯化的病毒上清液2.细胞培养基3.微型离心机4.10µl到1000µl可调式单道移液器及枪头5.50µl到300µl可调式多道移液器及枪头6.多通道微量吸液器7.酶标仪（450nm或620nm）四、储存条件l收到后，将重组p24标准品分装，并放在-20℃保存，避免反复冻融。其余成分放4℃保存。【试剂配制】l1×WashBuffer：用去离子水稀释10×WashBuffer到1×WashBuffer，并搅拌均匀。lFITC-ConjugatedAnti-HIV1p24MonoclonalAntibodyandHR

8、P-ConjugatedAnti-FITCMonoclonalAntibody：