检测过敏性皮肤病患者过敏原特异性lgg

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1、检测过敏性皮肤病患者过敏原特异性lgG检测过敏性皮肤病患者过敏原特异性lgG检测过敏性皮肤病患者过敏原特异性lgG检测过敏性皮肤病患者过敏原特异性lgG泸州医学院1999年第丝卷第6期JounudofLuz~ltMedicalCollegeVo].2No61999一{《:检测过敏性皮肤病患者过敏原特异性IgGDot—ELISA法的研究7.2/,兰堡!邑堕陈德宇张锡林f泸l州医学院.寄牛由学教研宰附属医院皮肤科64㈣第三军医大学寄生虫学教研室)摘要目的:了解过敏原对过敏性皮肤病患者的致敏状况,并研究检测方法的敏感性,重复性和试验的最适条件.方法:应用斑点一酶联免痤吸附

2、试验(Dot—ELISA)检测过敏性皮肤病患者血清对多种过敏原的特异性I抗体.结果:Dot—ELISA检测过敏原和抗过敏原的特异性抗体具较高特异性和敏感性.结论:Dot—ELISA为检测过敏性皮肤病患者过敏原的一种较好血清学诊断方法,具成本低,操作简便,观测结果直接等优点关键词Dot—EL1SA;过载性皮肤稿;过敏原——————1过敏性疾病为一种常见病,多发病,涉及临床各科,尤以皮肤病为甚.其诊断主要根据病史,体征和实验室检查.检测患者致敏的某种或多种过敏原或特异性lgn,I簧G抗体,能为诊断和治疗提供重要的依据.目前I临床上常用的过敏原检测方法为皮内试验,但其特异性

3、不高易出现假阳性或假阴性.我们采用斑点一酶联免疫吸附试验(Dot—ELISA)检测过敏性疾病患者血清中抗过敏原的特异性抗体,探讨患者对多种过敏原的致敏状况,为临床诊断和治疗提供依据.现将结果介绍如下:1材料和方法11过敏原由北京协和医院变态反应科提供的多种过敏原,包括呼吸道过敏原有早春花粉,晚春花粉,夏秋花粉和霉菌I,Ⅱ,Ⅲ,消化道过敏原有鸡蛋,兽毛,淡水鱼共9种过敏原,工作浓度皆为1:10.1.2实验血清共检测过敏性疾病患者血清54份,皆为泸州医学院附属医院住院及门诊病人,其中荨麻疹患者36例,其它过敏性疾病患者(包括过敏性哮喘,过敏性紫癜等)18例,对照组的健康人血

4、清26份,为无过敏史及过敏原皮内试验阴性的本室工作人员和学生.基本情况如下(表1).1.3Dot—EL璐A参照文献介绍的方法,并在固相载体硝酸纤维膜(Nc膜)的加工处理,过敏原滴加,操作过程等方面稍作改进.以此法检测过敏性疾病患者血清中抗过敏原的特异性[gC抗体.1.3.1NC膜吸附过敏原将NC膜置微量血凝板上用lml试管底部逐一压成凹盘,并于pH7.2的0.01MPBS液中平衡1小时,用滤纸压干,再在每个凹盘中滴加4u1(约6ug)各种过敏原,同时设置空白对照一孔.室温干燥后,置含10%/J~牛血清0.01MPBS液中振育封闭2小时,洗涤,凉干,于4~C保存备用.表I

5、检测血清的基本情况1.3.2操作方法1)在已吸附过敏原的每一个凹盘内滴加稀释的待检血清∞I11.37.c湿盒孵育2小时或置冰箱4.c过夜,PBS液洗涤3次后,凉风吹干.2)~11酶标羊抗人(武汉生物制品所提供,批号:920613,工作浓度1:100),如上法孵育,洗涤,用二氨基联苯胺(DAB)显色,观测结果.1.3.3结果判断每份血清作9种过敏原的检测,最后一孔作空白对照,肉眼判断各种过敏原斑点是否显示棕黄色反应来判断结果.2实验结果2.1检测过敏原Dot—ELISA实验条件的选择经棋盘滴定我们选择4ul(约6ug)的各种过敏原浓度为最适包被浓度,点样后,在室温下干燥,

6、置泸州医学院1999年第丝卷第6期JournalofLLIzhotLMedicalCollegeVal22No619994~C冰箱过夜为最佳过敏原包被温度.在酶标羊抗人IgG(GAHI一HPd’)X.作浓度为1:100条件下,以花粉过敏的特异性IgG阳性血清作试验,结果显示,待测血清最适稀释度为1:2.2.2Dot—ELISA检测过敏性疾病过敏原的结果我们采用Dot—EXJSA法测定过敏性疾病患者血清中特异性IgG,了解患者对过敏原(主要为花粉.霉菌等)的致敏状况,并与无过敏史的健康人相比较,另外也了解其它过敏性疾病如过敏性哮喘,过敏性紫癜等患者的致敏状况.其结果见表2

7、和附图.表2过敏性皮肤病患者对多种过敏原的反应检测对象血清例数——垫墼竖ABCDEFGHI荨麻疹3617623001951l2其它l886O1225114健康者26000000000注:A.早春花粉,B.晚春花粉.C夏社花粉患者与其它过敏性疾病患者血清特异性IgG无差异(p)0.05).23Dot—ELISA检测过敏原方法的敏感性,稳定性,重复性试验将3份Dot—ELISA测定早春花粉特异性IgG阳性血清从1-:4开始作倍比稀释试验,结果1:64时仍出现可见的棕黄色斑点,另将其中一份血清置一12~C保存,在4个月内采用同批试剂前后作5次D