瘀胆血清体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的实验研究论文

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1、瘀胆血清体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的实验研究论文钟晓琳，万居易，王忠琼，李昌平，胡莲【摘要】目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导其分化为肝细胞的可行性。方法分离、纯化并鉴定大鼠骨髓MSCs，制备正常及瘀胆大鼠血清，取第3代MSCs分组培养：A组：DMEM+10%FBS;B组：肝细胞生长培养基(HGM)+5%FBS;C组：HGM+5%正常大鼠血清;D组：HGM+5%瘀胆大鼠血清;E组：HGM+5%瘀胆大鼠血清+25μg/LHGF。观察各组细胞形态变化，MTT法测定细胞生长曲线.freelRNA阳性表达，第14，21天

2、出现CK18mRNA阳性表达，D、E组上清液中白蛋白浓度随诱导时间延长逐渐升高，且E组高于D组(P0.05)。A、B、C组未见AFP、CK18表达及白蛋白浓度变化。结论正常大鼠血清能明显促进MSCs的增殖;瘀胆血清对MSCs有一定促增殖作用，且能有效诱导其向肝细胞分化，联合使用HGF能提高分化率。【关键词】瘀胆血清;肝细胞生长因子;间充质干细胞;肝细胞ResearchontheDifferentiationofMesenchymalStemCellsInducedbyChelestaticSerainvitrointoHepatoc

3、yteZhongXiaolin,edicalColleg,LuzhouCity,SichuanProvince646000P.R.ChinaAbstractObjectiveTodiscussthepossibilityofthedifferentiationofmesenchymalstemcells(MSCs)inducedbychelestaticserainvitrointohepatocyte.MethodsRatbonemarroalandcholestaticseraofratsedium(HGM)+5%FBS),Gr

4、oupC(HGM+5%normalratsera),GroupD(HGM+5%cholestaticratsera)andGroupE(HGM+5%cholestaticratsera+25μg/LHGF);Themorphologicchangesoftheinducedcellseasurederasechainreaction(RT-PCR)andthealbumincontentinsupernatantinedbybromocresolgreenmethod.ResultMSCspolygonalandbinuclearc

5、ellsorphologicchangesofthecellsonstratedthatthecellsinGroupCproliferatedthefastestandthoseinGroupDandGroupEproliferatedfasterthanthoseinGroupB(P0.05);thepositiveexpressionofAFPmRNARNAinconcentrationinthese2groupsincreasedalongelengthofinduction,andtheconcentrationinGro

6、upEinconcentrationchangesalratseracanobviouslypromotetheproliferationofMSCs;cholestaticseraisofcertaineffectinMSCsproliferationandcaneffectivelyinducethedifferentiationofMSCsintohepatocytes,thebinedapplicationesenchymalstemcells(MSCs)hepatocyte近年来的研究表明，骨髓间充质干细胞(Mesench

7、ymalstemcell，MSCs)在一定条件下能分化为肝细胞1，这为临床上解决肝细胞移植、生物人工肝等的肝源短缺问题提供了新的思路2，但MSCs的分化方向受周围环境多种因素影响和决定，寻求适合MSCs增殖及向肝细胞定向分化的条件是目前尚需解决的重要问题。本研究采用含正常大鼠血清、瘀胆血清及肝细胞生长因子(hepatocytegroo公司，美国);倒置荧光显微镜、倒置相差显微镜(Olympus公司，日本);酶标仪(Bio-Rad公司，美国)PCR扩增仪(PE公司，美国)。1.3MSCs的分离、纯化与鉴定在无菌条件下取8～10周龄SC

8、s用于分化及鉴定。1.4MSCs的诱导培养1.4.1制备大鼠血清取健康)成分DMEM-LG、5%FBS、地塞米松10-7mmol/L、羟乙基哌嗪乙磺酸20mmol/L、葡萄糖1g/L、半乳糖2g/L、胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠10ml