微生物实验技术复习题

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1、1.用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用？答：（1）应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染.（2）操作时,先低倍再高倍.用完要擦掉油.（3）将聚光器升至最高位置并开足光圈。加香柏油,作用是（1）增加了显微镜的分辨率（2）增加照明亮度。2.什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物

2、像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。3.影响显微镜分辨率的因素有哪些？答：物镜的NA值（物镜的数值孔径）与照明光源的波长。4.根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效地观察。答：放线菌、酵母菌、霉菌相对较大，要观察形态用中倍镜就可以观察了，若要观察微生物的结构的话，还是要选择高倍镜或者油镜观察。细菌比较小，要用油镜观察，观察到的也只是细菌的形态，病毒不能在电子显微镜下观察。5.哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？（1）载玻片洁净涂片均匀不宜过厚固定温度不宜过高。水洗不要直接

3、冲洗涂面水流不宜过急过大（2）最关键是脱色，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌6.进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题?（1）着色不均匀，染色效果不好，不利于观察（2）菌体死亡或自溶，革兰氏阳性菌细胞通透性改变，结晶紫可以脱色透出7.革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色?不可以。因为碘与染料会结合成大分子，使得染料分子不能穿过细胞的细胞壁，对实验结果造成影响。脱色后复染前，革兰氏阳性菌呈紫色，阴性菌无色。8.不经过复染这一步，能否区别革兰氏阳性

4、菌和革兰氏阴性菌？答：不行。在复染之前，革兰氏阴性菌是无色透明的，在显微镜下很难观察到；或者之前脱色过度，也会造成阳性菌脱色，不经过复染，无法进一步区别。9.你认为制备细菌染色标本时,应该注意哪些环节?（1）涂片不宜过厚，以免脱色不完全，造成假阳性（2）乙醇脱色时间是革兰氏染色的关键，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌（3）固定温度不宜过高（4）应选择活跃生长期的幼龄培养物作染色10.为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察?答:1、若未完全干燥,载玻片上的液体会污染油镜镜头。镜头非常精密,被污染后不利于下次观察；2、若未完全干燥，水滴会影

5、响油与玻璃之间折光率，造成视野不够清晰。11.如果涂片未以热固定,将会出现什么问题?加热温度过高、时间太长，又会怎么样呢？答:如果没有加热固定的话，水分蒸发太慢或者在染色时菌体会被冲洗掉；如果加热时间过久，菌体变形或形态破坏，无法染色。12.制备培养基的一般程序是什么？答：称量——溶解—调PH值—融化琼脂—过滤分装—包扎标记——灭菌——倒平板13.做过本次实验后，你认为在制备培养基时要注意些什么问题？（1）注意配方（2）注意灭菌方法（3）配好的培养基要避免污染14.灭菌在微生物学实验操作中有何重要意义？答：防止培养基被污染；防止杂菌影响实验结果15.试述高压蒸汽灭菌

6、的操作方法和原理。答：高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。操作方法：加水——装料、加盖——排气——升压、保压、和降压——取料16.高压蒸汽灭菌时应注意哪些事项？（0）检查外桶内水量（1）物品不要堆放太紧或太靠近锅壁（2）灭菌结束后，要缓慢放气，切勿突然降压（3）降压完成后，趁热开锅取出物品（4）注意灭菌锅的保养17.如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养？请写出实验的主要步骤。观察其菌落形态，并

7、进行显微镜检测个体形态特征，或者再次划线分离。18.试述如何在接种中，贯彻无菌操作的原则?答：保持操作台的无菌状态与在无菌室操作；操作前，要进行手的消毒；接种环要加热灭菌；20.为何要用乳酸-石炭酸溶液作霉菌水浸片?答：用乳酸-石炭酸的优点是可使细胞不变形，具有杀菌、防腐作用；不易干燥，能保持较长时间；能防止孢子四处飞散。21.比较霉菌菌丝与假丝酵母菌丝的区别假菌丝与真菌丝明显不同处在于其两细胞间有一细腰，而不象真正菌丝横隔处两细胞宽度一致。22.细菌与酵母菌的菌落有何区别细菌菌落较小，酵母菌菌落较大。细菌菌落颜色多样，酵母菌菌落颜色单调。23.为什么随着显微镜