影响脐血多能非造血成体干细胞分离的相关因素研究论文

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1、影响脐血多能非造血成体干细胞分离的相关因素研究论文.freel2是原代培养的适宜接种密度，原代第72小时首次换液为最佳换液时问。利用所选条件培养的细胞可在体外持续扩增，并具有良好的分化潜能。结论：建立了人脐血多能非造血成体干细胞的体外优化培养条件，为其在组织工程方面的应用作出了新的探索。【关键词】干细胞；多能非造血成体干细胞；脐血；分离效率RelatedFactorsAffectingtheIsolationofMultipotentNon-hematopoieticAdultStemCellsfromUmbilicalCordBloodAbstractToinve

2、stigatetherelatedfactorsaffectingtheisolationofmultipotentnon-hematopoieticadultstemcells(MNASCs)fromhumanumbilicalcordbloodinlo(2%)condition，theisolationconditionsizedandtheyieldofMNASCsproved.MNASCsfromhumanumbilicalcordbloodsamplesediumponent，mediumexchangetimeandinitialplatingdensi

3、tyforisolationofMNASCsalcondition，thesurfaceantigenexpressionanddifferentiationpotentialofMNASCsediumofDMEM/F12condition.TheoptimalyieldofMNASCsononuclearcells2andthemediumovethenonadherentcellsafter72hoursofinoculation.MNASCsisolatedandculturedundertheabove-mentionedconditionsmaintain

4、edahomogenousmorphology，highpotentialabilityofexpansionanddifferentiation.ItisconcludedthatcultureconditionsdefinedinthisstudyisoptimalforthesuccessfulisolationandexpansionofumbilicalcordbloodMNASCsbersforsubsequentcellulartherapeuticapproaches.Keycell;multipotentnon-hematopoieticadult

5、stemcell;umbilicalcordblood;isolationefficiency近年来一些研究发现，脐血中存在具有多向分化潜能的非造血成体干细胞(multipotentnon-hematopoieticadultstemcells，MNASCs)。这类细胞可在体外培养扩增，并且能够分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、神经细胞等多种组织细胞［1，2］。由于脐血干细胞具有资源丰富、增殖和自我更新能力强、免疫原性弱等优势，对其进行开发和应用将对干细胞组织工程及其应用具有深远意义。目前从脐血中分离多能非造血成体干细胞多数仍然沿用Friedenstein等建立

6、的贴壁传代分离培养的方法，即利用不同细胞成分在塑料介质上黏附特性的差异，借助换液去除不贴壁的杂质细胞，传代纯化。本研究对利用这一方法在低血清条件下分离脐血多能非造血成体干细胞的相关影响因素进行了探讨，结果表明所用培养基种类、起始接种密度、初次换液时间等都是影响分离的重要因素。材料和方法脐血多能非造血成体干细胞的分离和培养将脐血以PBS缓冲液2倍稀释后，用淋巴细胞分离液（相对密度为1.077），400×g，离心20分钟，分离单个核细胞（MNC），洗涤后重悬于DMEM/F12培养液（GibcoBRL公司产品）中，计数细胞，用含2%胎牛血清（FBS，天津灏洋生物公司产品）

7、、40%MCDB-201（GibcoBRL公司产品）、10ng/ml人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF，PeproTech产品）、1×胰岛素－转铁蛋白－亚硒酸钠（ITS，GibcoBRL公司产品）的DMEM/F12培养液稀释，以1×106/cm2的细胞密度接种于6孔板中。置于饱和湿度、5％CO2的37℃培养箱中培养，72小时后换液，弃去非贴壁的细胞，以后每周换液2次，第14天计数集落数，超过50个细胞计为集落。当细胞达到70％－80％融合时，以含0.25％胰酶－0.1％EDTA的消化液消化，计为P0代细胞，传代培养。在检验培养基的影响时，脐血MNC分别以IMDM